甘氨鹅去氧胆酸对大鼠肝窦内皮细胞凋亡的影响

作     者：张燕军 罗庆锋 张静 池嵨健一 佐藤信紘 ZHANG Yanjun;LUO Qingfeng;ZHANG Jing;IKEJIMA Kenich;SATO Nobuhiro

作者机构：北京医院消化内科100730 河北医科大学第二附属医院检验科 日本东京顺天堂大学医学部消化内科 

出 版 物：《胃肠病学》 (Chinese Journal of Gastroenterology)

年 卷 期：2006年第11卷第5期

页      面：281-285页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主　　题：胆汁淤积 鹅脱氧甘胆酸 熊脱氧胆酸 细胞凋亡 

摘      要：肝窦内皮细胞(SEC)凋亡是肝脏疾病发生、发展的重要因素之一。在胆汁淤积症中,疏水性胆汁酸甘氨鹅去氧胆酸(GCDC)直接诱发肝细胞凋亡,而亲水性胆汁酸熊去氧胆酸(UDCA)能防止诱发肝细胞凋亡。目的:研究GCDC引起原代培养大鼠SEC损害和凋亡、UDCA对GCDC诱导凋亡的抑制作用以及涉及caspase-8的作用机制。方法:采用胶原酶A原位灌注和Percoll分离液(25%和50%)梯度离心法分离Wistar大鼠SEC,SEC于添加了EGM-2因子的EBM-2培养基中培养(5%CO2,37℃)3d,然后在含有GCDC和(或)UDCA的新鲜培养液中继续培养4h。以原位末端标记(TUNEL)技术检测SEC凋亡情况。以FLICE/caspase-8比色蛋白酶检测试剂盒测定caspase-8的表达情况。结果:相差显微镜下,培养3d时的SEC呈纺锤状并基本融合。而在与GCDC孵育的过程中SEC趋于皱缩,孵育4h时最终从培养皿脱落。SEC与不同浓度的GCDC(50～250μmol/L)孵育1h后,TUNEL染色阳性的细胞数量开始增加,4h后几乎所有细胞呈TUNEL染色阳性(P0.05);对照组SEC仅少数呈TUNEL染色阳性。在原代培养SEC与终浓度100μmol/LGCDC培养液中加入UDCA(50～200μmol/L)可明显减少TUNEL染色阳性的SEC,且抑制作用呈剂量依赖性(P0.05);200μmol/LUDCA存在时,GCDC引起SEC凋亡的水平是GCDC单独孵育4h时的20%。SEC与250μmol/LGCDC孵育2h,SEC中caspase-8表达明显增加,而加入200μmol/LUDCA则几乎可完全阻止caspase-8表达增加。结论:UDCA能阻止GCDC诱发的原代培养SEC凋亡,此作用至少部分是通过抑制GCDC上调SEC中caspase-8的表达而实现的。