重组早孕因子(EPF)的表达、纯化及鉴定

作     者：练玉银 王家骥 Yu-yin LIAN;Jia-ji WANG

作者机构：广州医学院公共卫生学院广州510182 

出 版 物：《生殖与避孕》 (Reproduction and Contraception)

年 卷 期：2012年第32卷第3期

页      面：156-160页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100211[医学-妇产科学] 10[医学] 

基　　金：广东省科技计划重点项目 项目号:2008A030201022 

主　　题：早孕因子(EPF) 表达 纯化 特性鉴定 

摘      要：目的:获取大量具有良好生物活性的早孕因子(EPF)重组蛋白。方法:从HeLa细胞中提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增EPF cDNA,将该cDNA插入载体pGEX-5X-1,获得重组表达质粒pGEX-5X-1/EPF,将重组表达质粒pGEX-5X-1/EPF转化大肠杆菌BL21后通过IPTG进行诱导表达,然后用谷胱甘肽-琼脂糖球珠亲和层析方法,分离纯化得到纯重组GST-EPF融合蛋白(rEPF)。再用Xa酶切GST,得到纯化的EPF重组蛋白。用SDS-PAGE鉴定其纯度,用Western blotting鉴定其特异性,用玫瑰花环抑制试验(RIT)检测其生物学活性。结果:HeLa细胞总RNA中有效扩增出EPF cDNA。EPF cDNA以正确的阅读框架插入表达载体pGEX-5X-1,经IPTG诱导后高效表达EPF重组蛋白。Western blotting表明其与抗EPF抗体有特异性结合,RIT检测结果显示目的蛋白具有良好的EPF生物学特性。结论:成功构建了EPF的原核表达载体,并纯化获得了具有生物学特性的重组蛋白,为进一步开展EPF蛋白的相关研究奠定了基础。