水稻Ca2+依赖性核酸酶融合蛋白的构建、纯化及酶活性分析

作     者：姜贵媛 张欣欣 Jiang Guiyuan;Zhang Xinxin

作者机构：东北林业大学盐碱地生物资源环境研究中心 

出 版 物：《分子植物育种》 (Molecular Plant Breeding)

年 卷 期：2018年第16卷第23期

页      面：7676-7682页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 

基　　金：中央高校基本科研业务费专项资金项目(2572014DA06)资助 

主　　题：水稻 Ca^2+依赖性核酸酶 载体构建 蛋白纯化 酶活性 

摘      要：为了进一步探究水稻(Oryzasativa)Ca^2+依赖性核酸酶基因OsCaN的功能,本研究通过PCR克隆出OsCaN,并将其插入到带有GST标签的原核表达载体pGEX-6p-3中。成功构建了pGEX-6p-3-OsCaN1、pGEX-6p-3-OsCaN3、pGEX-6p-3-OsCaN4原核表达载体,再将其转化到大肠杆菌BL21中,通过IPTG诱导表达融合蛋白。利用蛋白亲和层析柱对重组蛋白进行纯化并通过SDS-PAGE进行电泳检测,随后对核酸酶的酶活性进行鉴定。可以得到GST-OsCaN融合蛋白并检测出目的蛋白相对分子量约为64kD、65.5kD和82.5kD,同时确定了水稻OsCaN1、OsCaN3以及OsCaN4基因是钙离子依赖性核酸酶。本研究为后续分析水稻Ca^2+依赖性核酸酶OsCaN基因的生物学功能提供理论参考。