shRNA抑制缺氧条件下人视网膜色素上皮细胞低氧诱导因子-1α基因对血管内皮生长因子表达的影响
Down-regulation of vascular endothelial growth factor in human retinal pigment epithelial cells by small hairpin loop RNA targeting hypoxia inducible factor-1α under hypoxia condition作者机构：华中科技大学同济医学院附属协和医院眼科武汉430022 中山大学中山眼科中心
出 版 物：《中华眼科杂志》 (Chinese Journal of Ophthalmology)
年 卷 期：2007年第43卷第11期
页 面：1022-1027页
核心收录：
学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学]
主 题：RNA,小分子干扰 核蛋白质类 DNA结合蛋白质类 血管内皮生长因子A 缺氧 色素上皮,眼
摘 要：目的探讨缺氧条件下人视网膜色素上皮（hRPE）细胞低氧诱导因子-1α（HIF-1α）对血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法利用体外转录法合成针对HIF—1α mRNA序列的靶点之一的小发卡环RNA（shRNA），以化学低氧诱导剂CoCl2模拟RPE细胞缺氧环境，对缺氧培养条件下hRPE细胞的HIF-1α进行RNA干扰，通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测HIF-1α和VEGF mRNA的表达，免疫印迹法检测HIF—1α和VEGF蛋白水平，以正常组、缺氧组及阴性转染组作为对照，观察其对HIF-1α基因的沉默效果及对VEGF表达的抑制作用。结果转染HIF-1α mRNA的特异性shRNA后，RT-PCR检测结果显示缺氧条件下hRPE细胞HIF-1α基因沉默效果为77．1％，VEGF mRNA的表达水平下降了27．8％；免疫印迹法检测结果显示HIF—1α和VEGF蛋白水平显著降低。结论针对HIF-1α mRNA的shRNA能有效地使HIF-1α基因沉默，进而抑制缺氧对VEGF的上调作用。（中华眼科杂志．2007。43：1022—1027）
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