犬瘟热病毒反转录—聚合酶链反应检测方法的建立及初步应用

作     者：乔军 孟庆龄 夏咸柱 何宏彬 Qiao Jun;MENG Qing-ling;XIA Xian-zhu;HE Hong-bin

作者机构：塔里木农垦大学动科院新疆阿拉尔843300 解放军军需大学军事兽医研究所长春130062 东北农业大学生命科学院哈尔滨150030 

出 版 物：《西北农业学报》 (Acta Agriculturae Boreali-occidentalis Sinica)

年 卷 期：2001年第10卷第1期

页      面：51-54,66页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主　　题：犬瘟热病毒 反转录-聚合酶链反应 检测方法 

摘      要：根据 Gen Bank中 Barrett报道的犬瘟热病毒弱毒株 Onderstepoort的血凝蛋白基因序列 ,设计合成了一对能扩增 76 0 bp基因片段的引物。用异硫氰酸胍 -酚 -仿一步抽提法提取细胞总 RNA进行反转录 ,再以此产物为模板进行 PCR扩增 ,筛选出最佳扩增条件。结果以此对引物进行 PCR扩增能得到与设计片段大小相同的产物 ,并且不扩增犬细小病毒、犬 I型腺病毒、犬冠状病毒、狂犬病病毒的核酸。敏感性试验证实 ,此法能扩增出稀释 1 0 0 0倍的 CDV强毒细胞培养物 ( 1 0 5 .1 TCID5 0 /0 .1 ml)的反转录产物 ,其敏感性远高于电镜负染和荧光抗体染色法。经初步应用表明 ,此法可用于犬瘟热的临床诊断和实验研究。