巴西橡胶树HbICE1基因酵母双杂交诱饵载体的构建及互作蛋白的筛选

作     者：欧阳沫 唐潇 黄惜 袁红梅 OUYANG Mo;TANG Xiao;HUANG Xi;YUAN Hong-Mei

作者机构：海南大学农学院海口570228 

出 版 物：《植物科学学报》 (Plant Science Journal)

年 卷 期：2016年第34卷第2期

页      面：255-262页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金项目(31560197) 海南省自然科学基金项目(20153092) 海南省教育厅项目(Hnky2015-4) 海南大学科研启动基金资助(kyqd1437) 

主　　题：巴西橡胶树 HblCE1 酵母双杂 蛋白互作 冷耐受 

摘      要：寒害是我国植胶区的主要自然灾害之一,不仅影响橡胶产量还威胁到橡胶树的生存。拟南芥中,ICE1是低温胁迫信号通路中的重要转录激活因子,但橡胶树冷胁迫信号途径中包括Hb ICE1在内的大部分关键基因尚未被克隆与鉴定,与Hb ICE1蛋白发生互作的蛋白也不清楚,成为严重阻碍橡胶树抗寒分子机理研究的瓶颈。为了筛选和鉴定与巴西橡胶树Hb ICE1蛋白发生互作的蛋白,阐明橡胶树抵御寒害胁迫的分子机理,本文首先通过PCR扩增出Hb ICE1基因的编码序列(约1400 bp),然后将目标序列插入p GBKT-7载体,构建酵母双杂交诱饵载体;将该载体转入酵母Y2H菌株感受态细胞中,并在缺陷型培养基上检测其自激活活性,发现Hb ICE1基因的自转录激活在含有30 mmol/L和更高浓度3-AT(3-氨基-1,2,4-三氮唑)的培养基上能得到有效抑制;进一步通过与橡胶树c DNA文库进行酵母双杂交,筛选出一些可能与Hb ICE1发生互作的蛋白,包括DNA结合蛋白、核糖体蛋白和功能未知蛋白。本研究结果为橡胶树抗寒机理研究提供了重要理论依据。