建立绿色荧光蛋白标记的小鼠胚胎干细胞系及向心肌样细胞的分化(英文)

作     者：姜祖韵 袁毅君 陈良标 陆永良 姚行 戴利成 张铭 JIANG Zu_Yun 1 YUAN Yi_Jun 1,2 CHEN Liang-Biao 3 LU Yong-Liang 4 YAO Xing 4 DAI Li_Cheng\+4\ ZHANG Ming 1* 1 (College of Life Science, Zhejiang University, Hangzhou\ 310012, China) 2(College of Life Science and Chemistry, Tianshui normal University, Tianshui 741000, China) 3(Institute of Genetics and Developmental Biology, Chinese Academy of Science, Beijing 100101, China) 4(Central Hospital of Huzhou, Huzhou 313000, China)

作者机构：浙江大学生命科学学院杭州310012 中国科学院遗传与发育生物学研究所北京100101 浙江省湖州市中心医院湖州31300 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2004年第20卷第6期

页      面：890-895页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071009[理学-细胞生物学] 09[农学] 0901[农学-作物学] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：浙江省重大项目 (No .J 2 0 0 2 0 5 79 3 0 116) 湖州中心医院合作项目 (No .H2 0 0 10 984 3 2 5 3 6)~~ 

主　　题：小鼠胚胎干细胞 绿色荧光蛋白 转染 分化 心肌细胞 

摘      要：带有GFP基因的ESD3细胞系是一个良好的可以用于研究体内和体外细胞分化和组织产生的模型。用磷酸钙共沉淀法将质粒pEGFP N2导入小鼠胚胎干细胞D3细胞系中 ,在荧光显微镜下以 4 88nm激发光检查阳性克隆 ,并进行初步扩增。经G4 18筛选后 ,机械挑取EGFP强阳性表达的克隆 ,并在丝裂霉素C处理的小鼠胚胎成纤维细胞的饲养层上 ,在无选择性压力的条件下 ,进一步扩大培养 ,获得纯化的转染细胞系。 2 0代以后 ,转染细胞仍然表达绿色荧光蛋白。PCR检测表明 8代和 18代转染细胞均携带有GFP标志基因。对稳定表达EGFP的干细胞系进行碱性磷酸酶染色、拟胚体和畸胎瘤形成的检测 ,证明这些细胞具有干细胞的特征。经拟胚体 ,可进一步分化成具有搏动能力的心肌细胞 ,分化百分率为 30 %～ 4 0 % ,较未转染细胞 6 0 %～ 70 %的分化率低 ,造成低分化率机制还不清楚。这些细胞在激光共聚焦显微镜下呈绿色荧光 ,免疫组化染色显示具心肌细胞特异的cTnT分子标志。该EGFP标记的干细胞系带有可进行原位、实时检测的绿色荧光 。