烟曲霉几丁质酶基因的克隆与表达

作     者：王颖 王俊琦 胡红焱 杨雪鹏 杨寿钧 余小应 金城 

作者机构：中国科学院微生物研究所微生物资源国家重点实验室北京100080 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2004年第20卷第6期

页      面：843-850页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：由中国科学院创新项目 (KSCX2 3 0 2 0 1) 国家重大基础研究规划前期研究专项 (No .2 0 0 1CCA0 0 10 0 )资助~~ 

主　　题：烟曲霉(Aspergillus fumigatus) 几丁质酶(chitinase) cDNA 表达 稳定性 

摘      要：Chi4 4是烟曲霉 (Aspergillusfumigatus)YJ 4 0 7产生的一种胞外几丁质酶。通过用真菌几丁质酶保守氨基酸序列与Chi4 4的N 端序列检索烟曲霉部分基因组序列数据库 ,获得一个编号为contig5 5 5的烟曲霉基因组序列 ,可能包含烟曲霉几丁质酶的基因。根据检索结果用RT PCR方法从烟曲霉YJ 4 0 7中克隆到 1 4kb的cDNA片段 ,该cDNA的ORF编码一个 395个氨基酸的蛋白 ,分子量为 4 3 6kD。对其推导氨基酸序列分析表明该蛋白与其它真菌来源的几丁质酶同源 ,而且活性中心与人巨噬细胞几丁质酶高度同源。该cDNA已在E .coli与PichiapastorisGS115中获得表达 ,分别获得 4 3kD和 4 4kD的重组蛋白 ,两种重组蛋白均有几丁质酶活性。与野生酶相比 ,大肠杆菌表达的 4 3kD重组酶及Pichia酵母表达的 4 4kD重组酶稳定性下降 ,说明Chi4