HIV-1膜蛋白基因片段杆状病毒转移载体克隆及重组体的构建

作     者：胡波 李朝霞 周宇麒 梁敏坚 罗敏琪 李林 

作者机构：中山大学附属第三医院检验科广东广州510630 中山大学附属第三医院内科广东广州510630 

出 版 物：《免疫学杂志》 (Immunological Journal)

年 卷 期：2003年第19卷第2期

页      面：127-131页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

主　　题：HIV-1 杆状病毒 gp120 gp41 昆虫细胞 艾滋病 宿主细胞 

摘      要：目的 构建编码HIV 1外膜糖蛋白的gp12 0和gp4 1基因杆状病毒转移载体 ,并在昆虫细胞中表达gp12 0和gp4 1重组蛋白。方法 从HIV 1基因克隆PNL4 3(NY5 /LAV)中应用聚合链反应扩增目的基因gp12 0和gp4 1,克隆到PGEM T载体中,限制性内切酶酶切、DNA序列分析鉴定目的基因 ,再经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后定向克隆到杆状病毒转移载体PACSecG2T中 ,再次测序鉴定。通过在sf9昆虫细胞中同源重组、空斑筛选、病毒鉴定、SDS PAGE、Western blot对重组病毒和重组蛋白进行分析。结果 限制性内切酶酶切和DNA序列分析表明 ,gp12 0和gp4 1正确克隆到杆状病毒转移载体PACSecG2T中 ;SDS PAGE和Western blot结果表明在昆虫细胞中成功表达了HIV外膜糖蛋白gp12 0和gp4 1。结论 成功构建了PACSecG2T gp12 0和PAC SecG2T gp4 1杆状病毒转移载体 ,并在杆状病毒 昆虫细胞表达系统中表达了HIV 1gp12 0和gp4 1重组蛋白 ,Wes tern