绵羊骨髓细胞抗菌肽基因的改造及其在原核生物中的表达

作     者：刘科鹏 柴晓虹 韩跃武 姚海燕 张雪燕 徐攀 LIU Ke-peng;CHAI Xiao-hong;HAN Yue-wu;YAO Hai-yan;ZHANG Xue-yan;XU Pan

作者机构：兰州大学基础医学院生物化学与分子生物学研究所甘肃兰州730000 甘肃省第二人民医院检验科甘肃兰州730000 甘肃农业大学草业学院草业生态系统教育部重点实验室甘肃省草业工程实验室中-美草地畜牧业可持续发展研究中心甘肃兰州730070 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2014年第27卷第9期

页      面：1164-1167页

学科分类：0710[理学-生物学] 0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 1002[医学-临床医学] 07[理学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 071007[理学-遗传学] 0703[理学-化学] 0836[工学-生物工程] 

主　　题：绵羊骨髓细胞抗菌肽 基因改造 原核细胞 基因表达 

摘      要：目的通过对绵羊骨髓细胞抗菌肽(sheep myeloid antibacterial peptides with 29 amino acids,SMAP-29)的活性片段SMAP-29(1-18)基因的改造,使其以C-端融合蛋白的形式在大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)中表达。方法根据大肠埃希菌偏爱密码子表,将SMAP-29的活性片段SMAP-29(1-18)基因序列进行改造,应用ProtParam分析SMAP-29的理化特性,Anthorprot软件预测其螺旋轮结构,设计新的基因片段,插入质粒pET-30a中,构建重组表达质粒pET-30aSMAP-29[1-18,K2,4,L13],转化感受态E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物过2次Ni2+NTA His Bind resin柱进行纯化。结果 SMAP-29基因序列经改造后,稳定性、等电点及半衰期均明显提高。重组质粒经PCR、双酶切及测序鉴定,证明构建正确。表达的重组蛋白相对分子质量约61 257,以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的41%,纯度为81%。结论已成功对SMAP-29基因进行改造,实现了其在E.coli BL21(DE3)中的高表达,获得了纯度较高的目的蛋白,为进一步规模化生产SMAP-29奠定了理论及实践基础。