体外转染人IGF-1基因重组腺病毒载体对兔椎间盘髓核细胞凋亡的影响

作     者：张长春 崔国鹏 邵晨 周新社 肖玉周 周建生 

作者机构：蚌埠医学院第一附属医院安徽省组织移植重点实验室安徽蚌埠233004 

出 版 物：《中国修复重建外科杂志》 (Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery)

年 卷 期：2013年第27卷第11期

页      面：1375-1379页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

基　　金：安徽省高校省级自然科学研究重点项目(KJ2011A204)~~ 

主　　题：椎间盘退变 IGF-1 腺病毒载体 髓核细胞 细胞凋亡 兔 

摘      要：目的探讨体外转染人IGF-1（humanIGF-1，hIGF-1）基因腺病毒载体（***-1）对TNF-α诱导的兔椎间盘髓核细胞凋亡的影响。方法取8只健康成年家兔（雌雄不限，体重2．0～2．5kg）椎间盘髓核，以II型胶原酶消化法分离培养髓核细胞。取第2代对数生长期髓核细胞，根据培养条件不同分为3组。空白组：以含10％PBS的DMEM／F12培养基培养；TNF-α组：在空白组培养基中加入100ng／mLTNF-α：Ad-hIGF—1组：在TNF．Ⅸ组培养基中加入感染复数为50的Ad-hIGF-1。荧光显微镜下观察***-1组病毒转染情况。各组培养48h后，行RT-PCR及Westernblot检测hIGF-1mRNA和蛋白表达，TUNEL法及流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果荧光显微镜下观察示，***一1组细胞发出绿色荧光，提示转染成功。RT-PCR及Westernblot检测示，***-1组可见hIGF-1mRNA及蛋白表达条带，而空白组和TNF-α组均未见。TUNEL法检测示，TNF-α组、***-1组及空白组细胞凋亡率分别为34．24％±4．60％、6．59％±1．03％、0．40％±0．15％；流式细胞仪检测示，TNF-α组、Ad—hIGF-1组、空白组早期凋亡率分别为22．16％±2．69％、5：03％±0．96％、0．49％±0．05％，晚期凋亡率分别为13．96％±4．86％、10．68％±3．42％、0．29％±0．06％：以上检测指标TNF-α组均显著高于空白组、***-1组（P〈0．05），***-1组高于空白组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论hIGF-1基因对TNF-α体外诱导的兔髓核细胞凋亡有抑制作用。