人干细胞因子在大肠杆菌中的表达研究

作     者：毛华 赵峻 张劲秋 狄旭 陈卫东 陈松森 梁植权 

作者机构：中国医学科学院中国协和医科大学 基础医学研究所北京100005 

出 版 物：《中国医学科学院学报》 (Acta Academiae Medicinae Sinicae)

年 卷 期：1998年第20卷第4期

页      面：279-284页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家"九五"科技攻关项目(96-C02-01-10) 

主　　题：重组 高效稳定表达 SD序列 干细胞因子 

摘      要：目的 经过改造重组人干细胞因子(human stem cell factor,hSCF),提高其表达量。方法 应用人工合成寡核苷酸引物及PCR技术,改变人干细胞因子hSCF cDNA起始密码子ATG与SD序列之间的距离及在翻译起始区(即N端氨基酸)部分采用大肠杆菌(***)喜用型密码子的策略,使重组表达质粒pBV220-hSCF在***中获得高效稳定表达。结果 DNA序列测定证明基因的阅读框架完全正确。重组人干细胞因子的表达量从改造前占***总蛋白的12%提高到40%左右。纯化的重组hSCF N端17个氨基酸测序结果表明,除第一个氨基酸为甲硫氨酸外,其余与天然hSCF序列完全一致。纯化的重组hSCF经Western blot证明,与标准hSCF一致。结论 提示hSCF cDNA的5′侧翼区结构对其基因表达有显著的影响。