RNA干扰Akt对食管癌细胞株Eca109生物学特性的影响
RNA interference-mediated down-regulation of Akt attenuates cell proliferation and migration in human esophageal squamous cell carcinoma cell line Eca109作者机构:南京医科大学第一附属医院消化科江苏省南京市210029
出 版 物:《世界华人消化杂志》 (World Chinese Journal of Digestology)
年 卷 期:2011年第19卷第5期
页 面:451-456页
学科分类:1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学]
摘 要:目的:探讨RNA干扰沉默Akt对人食管鳞癌细胞体外增殖、迁移及血管生成拟态(VM)形成的影响.方法:应用倒置荧光显微镜观察Akt的干扰质粒转染食管癌细胞Eca109后绿色荧光蛋白的表达;采用Western blot方法检测Akt蛋白的表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测转染前后细胞增殖能力的变化;Transwell方法检测干扰前后细胞迁移能力的变化;取24孔培养板每孔加入300μL Matrigel原液,待其凝固,每孔内接种1mL浓度为5×105/mL的各组细胞悬液,培养12h后观察并计数转染前后各组细胞的管状结构数量.结果:Eca109/8单克隆干扰效果好,Western blot结果显示几乎无Akt表达.Akt被干扰后,细胞增殖能力明显减弱(P0.05),运动迁移能力显著下降,与未转染的细胞相比穿过人工基底膜的细胞数明显减少(59.33±2.87 vs 130.5±2.22,P0.05).三维培养提示干扰后细胞的管状结构数量明显减少(P0.05).结论:RNA干扰可引起Eca109中Akt的沉默,而Akt表达下调后食管癌细胞株Eca109的增殖与迁移能力及VM能力均减弱.推测阻断Akt通路有可能成为治疗人食管鳞癌的新靶点.