水貂IFN-α、IFN-β及IFN-γmRNA荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

作     者：王洋 胡博 张海玲 鲁荣光 吕爽 刘昊 孙彦刚 马凡舒 赵建军 张蕾 薛向红 史宁 白雪 徐淑娟 范思宁 凌明玉 李欣彤 闫喜军 WANG Yang;HU Bo;ZHANG Hai-ling;LU Rong-guang;L Shuang;LIU Hao;SUN Yan-gang;MA Fan-shu;ZHAO Jian-jun;ZHANG Lei;XUE Xiang-hong;SHI Ning;BAI Xue;XU Shu-juan;FAN Si-ning;LING Ming-yu;LI Xin-tong;YAN Xi-jun

作者机构：中国农业科学院特产研究所经济动物疫病研究室吉林长春130112 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 

出 版 物：《动物医学进展》 (Progress In Veterinary Medicine)

年 卷 期：2015年第36卷第11期

页      面：1-6页

学科分类：090602[农学-预防兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：吉林省科技发展计划项目(20130206026NY 20140520172JH) 吉林市杰出青年项目(2013625018) 吉林市科技发展计划(2013222014) 

主　　题：SYBR GreenⅠ 实时荧光定量PCR 水貂 α干扰素 β干扰素 γ干扰素 

摘      要：为采用SYBR GreenⅠ染料建立检测水貂IFN-α、IFN-β和IFN-γmRNA荧光定量RT-PCR检测方法,根据GenBank中登录的MiIFN-α和MiIFN-β、MiIFN-γ和3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)基因序列,分别设计合成特异性引物,通过RT-PCR扩增MiIFN-α、MiIFN-β、MiIFN-γ和MiGAPDH的基因片段,构建到pMD18-T载体中制备质粒标准品,建立了相应基因mRNA的荧光定量RT-PCR检测方法并建立标准曲线。结果表明,MiGAPDH、MiIFN-α和MiIFN-β和MiIFN-γ基因的Ct值与标准品稀释度在10拷贝质粒/μL^107拷贝质粒/μL内均呈良好的线性关系,相关系数(R2)均为1.00,熔解曲线均呈单一熔解峰,检测下限为10拷贝质粒/μL,重复性试验表明组内、组间变异系数均小于4.5%。临床样品检测结果表明水貂感染肠炎病毒后,MiIFN-α、MiIFN-β和MiIFNγ相对表达水平均在6d达到最高峰值,MiIFN-α相对表达量要比MiIFN-β和MiIFN-γ相对表达量高两个数量级,并且在感染期(4d^6d)MiIFN-α相对表达量明显提高。本研究为水貂IFN mRNA的定量分析提供了有效工具。