雷帕霉素诱导人黑素瘤细胞M14自噬及Bcl-2、Bax表达的变化

作     者：沈景刚 周梅华 李雪 吴迪 鲁严 

作者机构：南京医科大学第一附属医院皮肤科江苏南京210029 

出 版 物：《南京医科大学学报（自然科学版）》 (Journal of Nanjing Medical University(Natural Sciences))

年 卷 期：2012年第32卷第3期

页      面：343-348页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81171517) 江苏省社会发展计划项目(BS2007072) 

主　　题：黑素瘤细胞 雷帕霉素 自噬 Bcl-2 Bax 

摘      要：目的:对雷帕霉素诱导黑素瘤细胞发生自噬的过程进行观察,并初步探讨其可能的机制。方法:不同浓度雷帕霉素(10、50、100 nmol/L)处理黑素瘤细胞M14,采用MDC荧光染色检测自噬囊泡;免疫细胞化学法检测自噬蛋白LC3B的表达;透射电子显微镜观察黑素瘤细胞超微结构的变化;Western blot检测细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达;采用罗丹明123染色(Rhodamine 123)流式细胞术检测线粒体膜电位的变化;MTT比色法检测雷帕霉素对M14细胞增殖的抑制作用。结果:经不同浓度的雷帕霉素处理后,MDC阳性细胞数增多,M14细胞发生自噬;自噬蛋白LC3B的表达增强;自噬水平随雷帕霉素浓度的升高而逐渐增强。透射电子显微镜观察可见M14细胞质内有大量独立双层膜结构、线粒体肿胀并出现自噬体、自噬溶酶体。Western blot结果显示雷帕霉素可以下调M14细胞中的凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达,同时上调凋亡诱导蛋白Bax的表达。雷帕霉素可引起M14细胞的线粒体膜电位下降,与对照组相比差异显著(P0.05)。10～100 nmol/L的雷帕霉素明显抑制黑素瘤细胞M14的增殖,该作用呈剂量依赖性,随着药物浓度的升高,抑制率增加,与空白对照组比较均有显著性差异(P0.01)。结论:10～100 nmol/L的雷帕霉素可诱导黑素瘤细胞发生自噬,抑制细胞的生长。其机制可能与蛋白Bcl-2和Bax表达水平有关。