一种新型广谱的原核型分泌表达载体的建立及人表皮生长因子的表达

作     者：郝春芳 徐虹 章军 刘仁海 Hao Chunfang;Xu Hong;Zhang Jun;Liu Renhai

作者机构：厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门361005 

出 版 物：《高技术通讯》 (Chinese High Technology Letters)

年 卷 期：2007年第17卷第11期

页      面：1192-1197页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 0810[工学-信息与通信工程] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 0805[工学-材料科学与工程（可授工学、理学学位）] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 0812[工学-计算机科学与技术（可授工学、理学学位）] 

基　　金：国家自然科学基金(30571422)和厦门市科技计划(3502Z20073008)资助项目 

主　　题：人表皮生长因子(hEGF) 信号肽序列 分泌型表达 载体 蓝藻 

摘      要：通过Cyanobase藻类学数据库查询,从集胞藻6803转译后加工过程中的某些蛋白的分泌信号序列得到了可以用于分泌型表达的信号序列,进一步通过SignalP3.0Server分析软件预验证,从集胞藻6803得到4种不同蛋白的信号序列A、B、C、D,将这些信号序列插入pET-His-EGF表达载体hegf基因上游,得到了带有分泌型信号的pS-X系列分泌型表达载体,人表皮生长因子（hEGF）在其中的pS-A载体中实现了分泌型表达,hEGF分泌到周质空间的相对表达量约为1%,在其它3个载体中未见表达。获得的pS-A分泌型表达载体是一种新型分泌型表达载体,它利用蓝藻信号序列作为分泌表达的信号肽,实现了hEGF多肽在大肠杆菌中分泌表达,通过融合白亚细胞定位法处理得到的hEGF多肽在胞质、周质空间和培养基中表达的比例为85∶33∶25（density intensity/mm^2）,利用渗透休克处理方法得到的比例为50∶37∶25。由于A信号序列本身是集胞藻6803膜蛋白（ID：s110172/NCBI-GI：1001433）的分泌信号肽,说明pS-A载体是一种广谱的原核型分泌表达载体。这一结果为实现hEGF在螺旋藻中的分泌型表达奠定了基础。