全骨髓培养法和密度梯度离心法分离hBMSCs的比较研究

作     者：黄谦 吴涛 梁杰 杨科跃 金丹 

作者机构：广东医学院整形外科研究所广东湛江524023 南方医科大学南方医院创伤骨科 

出 版 物：《中国修复重建外科杂志》 (Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery)

年 卷 期：2009年第23卷第11期

页      面：1360-1364页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30872638) 教育部霍英东高等院校青年教师基金资助项目(111043)~~ 

主　　题：hBMSCs 全骨髓培养法 密度梯度离心法 细胞分离 

摘      要：目的比较全骨髓培养法和密度梯度离心法对hBMSCs的分离效果。方法取健康成年人自愿捐赠的骨髓,分别采用全骨髓培养法和密度梯度离心法分离、培养hBMSCs并进行传代。采用倒置相差显微镜观察原代细胞形态变化;取第2代细胞培养7d后行HE染色;对比原代及第2、3代细胞传代时间;流式细胞仪检测表面标志物;并检测细胞经成骨诱导后3、6、9d的ALP含量,于第9天采用Kaplow法染色观察细胞ALP染色情况。结果全骨髓培养法分离的原代细胞呈聚集样生长,而密度梯度离心法分离的原代细胞呈单个、散在生长。HE染色示两种方法分离培养的第2代细胞轮廓清晰,大小及形态均匀一致。全骨髓培养法原代细胞的传代时间(15.36±1.67)d;明显快于密度梯度离心法的(18.57±1.05)d,差异有统计学意义(P0.05)。经流式细胞仪检测,两种方法培养的hBMSCs上阳性表面标志物CD29、CD44、CD71、CD105、CD166含量和阴性表面标志物CD34含量比较差异无统计学意义(P0.05),阴性表面标志物CD14、CD45含量差异有统计学意义(P0.05);成骨诱导后第9天ALP染色程度基本一致。结论全骨髓培养法可分离出hBMSCs,其分离效果与密度梯度离心法相似。