小鼠淋巴细胞白血病（Ｐ３８８）生物学特性的研究

作     者：欧阳卓志 王红兵 李革 张呈生 刘亚莉 刘增华 李广粹 ##1 小鼠淋巴细胞白血病(P388)生物学特性的研究##2@欧阳卓志,王红兵,李革,张呈生,刘亚莉,刘增华,李广粹$中国医学科委实验动物研究所##3对从国外引进的小鼠淋巴细胞白血病(P388)的生物学特性进行了观察,实验结果表明以DBA/2近交小鼠为宿主,腹腔播种小鼠淋巴细胞白血病(P388)瘤细胞悬液,传代宜用第6一8天荷瘤鼠之腹水,每只鼠接种瘤细胞数宜大于1OO万。其接种成活率为98.6%,有1.4%的自发消退.肿瘤生长潜伏期3-4天,第4～6天为缓慢生长期,第6-12天为迅速生长期,瘤细胞的倍增期略早于腹水的倍增期.第12天后,动物呈明显恶液质状态并进入濒死期,宿主平均存活14.7±3.21天。自第6日起荷瘤小鼠平均每日腹水增长1.26ml.至第14日,平均腹水总量可达12-13ml.##4小鼠白血病,P388,生物学我特性##5小鼠淋巴细胞白血病(P388)生物学特性的研究欧阳卓志,王红兵,李革,张呈生,刘亚莉,刘增华,李广粹中国医学科委实验动物研究所[摘要]对从国外引进的小鼠淋巴细胞白血病(P388)的生物学特性进行了观察,实验结果表明以DBA/2近交小鼠为宿主,腹腔播种小鼠淋巴细胞白血病(P388)瘤细胞悬液,传代宜用第6一8天荷瘤鼠之腹水,每只鼠接种瘤细胞数宜大于1OO万。其接种成活率为98.6%,有1.4%的自发消退.肿瘤生长潜伏期3-4天,第4～6天为缓慢生长期,第6-12天为迅速生长期,瘤细胞的倍增期略早于腹水的倍增期.第12天后,动物呈明显恶液质状态并进入濒死期,宿主平均存活14.7±3.21天。自第6日起荷瘤小鼠平均每日腹水增长1.26ml.至第14日,平均腹水总量可达12-13ml.关键词小鼠白血病,P388,生物学我特性小鼠淋巴细胞白血病(P388)是目前国际上公认对天然药物最敏感的肿瘤,广泛用于抗癌药物的筛选和研究抗癌药物作用原理.该肿瘤是用3一甲基胆蒽涂在一只DBA/2小鼠上诱发出来的,70年代初引进我国供科研使用,至今已达20年之久。关于这个肿瘤的移植和生长的一般规律是否会发生某些变异,目前国内尚无这方面的报道。为了便于我国科研工作者利用该肿瘤时能了解其生长规律,我们对P388的生物学特性和瘤细胞形态学进行了初步的观察。材料和方法一、瘤株:小鼠淋巴细胞白血病,1989年由中国医学科学院药物研究所惠赠,由本室长期传代保种。二、动物:DBA/2近交系小鼠,体重18一22g,雌性兼用。由本所实验动物繁育场提供。三、实验方法(3):选择接种P388肿瘤后6-8天健康状况较好的荷瘤小鼠,用颈椎离断法处死。在无菌条件下抽取腹水,按1:10即1ml腹水加10ml无菌生理盐水稀释。将上述瘤细胞悬液给DBA/2小鼠接种,每只鼠腹腔注射0.2ml即为下代P388小鼠。统计DBA/2小鼠接种P388后的发病率及存活时间,观察有无自发消退现象。在不同的实验中,则按实验要求配制成不同稀释度的瘤细胞悬液,并进行活瘤细胞计数。各次实验均为每只鼠腹腔接种瘤细胞悬液0.2ml,分别观察P388在小鼠体内的生长特性,腹水和瘤细胞的生长曲线,不同瘤细胞数与宿主肿瘤发病率及存活时间的关系和P388小鼠的血像变化等。四,DBA/2小鼠的遗传检测:取正常DBA/2小鼠一只,另取接种肿瘤后生长腹水和未生长腹水之小鼠各一只,分别自眼眶采血,制备血浆、溶血素,处死动物后取肾脏制备组织匀浆,将上述血浆、溶血素、肾组织匀浆等待测样品用醋酸纤维薄膜电泳,测定碳酸酐酶-2(Car-2)、酯酶一1(Es一1),酯酶一3(Es一3)、A葡萄糖6磷酸脱氢酶一1(Gpd-1)、葡萄糖-6-磷酸异构酶-1(Gpi-1)、运铁蛋白(Trf)、酯酶-10(Es-l0)共7个生化位点。五、瘤细胞形态学观察:将有腹水的荷瘤小鼠断颈处死,抽取腹水,将其离心沉淀,弃去上清液以生理盐水洗涤沉淀细胞,然后以1000rpm离心10分钟,收集沉淀的细胞,Bouin氏液固定,石蜡包埋切片,HE染色,光镜检查。结果与讨论一、DBA/2小鼠接种p388后的肿瘤发病作者单位.北京潘家园南里邮编:100021率及存活时间:统计了从1989年9月至1990年12月传代用的DBA/2小鼠共50代,雄性376只、雌性248只共624只动物,腹腔接种后产生腹水者雄性370只、雌性245只共615只动物,其发病率为98.6%,宿主存活时间为11一17天,平均14.07±3.24天。不同性别的DBA/2小鼠接种P388的结果见表1。根据美国国立癌症研究所的资料(4),接种P388的小鼠平均存活时间为9～14天。本实验的结果表明,我国目前用于实验的P388小鼠的平均存活时间有所延长。两种性别小鼠之间则无明显差异(P<0.05)。二、小鼠移植P388后自发消退现象的观察:在整个传代过程中,有雄性6只、雌性3只共9只DBA/2小鼠(占总数的1.4%),在接种30天后仍未见腹水生长迹象,动物一般状态良好。将3只动物做大体解剖观察,腹腔内无腹水,各脏器未见明显病理改变。用生理盐水洗涤腹腔后作涂片镜检,也未检出P388瘤细胞。将2只未长腹水之小鼠做重复接种实验,另取2只正常DBA/2小鼠做对照组。在1周内,对照组均生长腹水,腹部明显膨隆,第13天动物死亡.而2只重复接种的小鼠到30天后仍未生长腹水,解剖也未见肿瘤。取正常DBA/2小鼠、接种P388后的荷瘤小鼠和未长腹水之小鼠备1只,作7个生化位点的遗传检测,结果3只DBA/2小鼠所测7个生化位点的表现型均与本所繁育场的DBA/2近交系小鼠的标准型相同,未测出遗传差异。在美国国立癌症研究所的药物研制计划中,P388是用于天然产品初筛方面的标准筛选系统(5)DBA/2小鼠接种P388后,其生存期应在规定范围内,若超过观察时间而无肿瘤生长的迹象表示接种失败,可从肿瘤、宿主、操作技术、有无感染等方面找出失败的原因。本实验中肿瘤长期传代由专人负责、无菌操作,再通过重复移植实验,已可排除因肿瘤、操作技术、感染等原因造成的接种失败。按常规的小鼠生化位点遗传检测程序,对7个常用生化位点进行了检测,未检测出遗传差异,但决定小鼠组织移植后的排斥反应是由第17对染色体上的主要组织相容性复合体(majorhistocompatibilitycomplex,MHC)来控制的,这提示某些DBA/2小鼠可能发生遗传变异而造成组织相容性的改变,导致接种肿瘤后的排斥反应。小鼠的MHC称为H-2系统,本实验中因未长腹水之小鼠数目有限,标本量不足,未能进行H-2系统的检测,故导致1.4%自发消退的真正原因尚待进一步研究。三、小鼠移植P388后的生长特性:DBA/2小鼠50只,雌雄各半,体重17～23g,按1:10瘤细胞悬液0.2ml/只接种于小鼠腹腔,活瘤细胞计数为2.2×l06/只。次日将动物随机分组,每组8只,于接种后第4日开始,隔日处死一组动物,直至第14日。每次处死前称动物体重,抽腹水计量并进行活瘤细胞计数。结果见表2。1动物体重变化:DRA/2小鼠按种瘤细胞后,腹部逐渐膨大,第6日即出现明显腹型,第8～12大为荷瘤体重倍增期,以后荷瘤体重稳定在28～30g之间(图1).若除去腹水量,则动物实际体重在整个生存期中无明显增长,第6日后,动物实际体重急剧下降,第12日后,动物呈现严重液质状态,其实际体重比实验开始时已下降21.8%,动物进入濒死期。2腹水和瘤细胞的增长情况在接种肿瘤后第4天,解剖第一组动物时,平均腹水量已达1.3±0.4ml,潜伏期仅3～4天,第4～6天为腹水缓慢增长期,第6天以后腹水量急剧增加,第12天以后趋缓,至第14天,小鼠平均生成腹水12～13ml;(图2)。瘤细胞从第4天开始就进入倍增期,井持续增长至第10天以后增长速度减缓并出现血性腹水,此时的动物腹水瘤细胞已不适宜供其它实验用.第12天后,腹水中瘤细胞大量死亡,故活瘤细胞计数急剧下降(图3).腹水中瘤细胞密度在第6天前急剧上升,以后因瘤细胞的大量增殖刺激了宿主腹水的急剧增长,故腹水中瘤细胞密度开始逐渐下降(图4)。四、接种瘤细胞数与宿主肿瘤发病率及存活时间的关系:按不同稀释度瘤细胞悬液接种动物后,观察各组动物发病率及存活时间。结果见表3.对50种雌性DBA/2小鼠进行实验的结果表明,移植成功率为98%,第2组有1只动物发生自发消退。随着移植瘤细胞数的减少,小鼠潜伏期及存活时间逐渐延长,但稀释度到1:30以后,接种瘤细胞数少于105;则动物存活时间无明显差异。但稀释度到1:160.接种瘤细胞数4.1xl04,仍能保证动物全部发病。五、小鼠移植P388后血像变化:取雄性DBA/2小鼠10只,体重18～22g。腹腔接种瘤细胞。于接种前及接种后4、8,11天查尾静脉血4次,结果见表4。六.P388瘤细胞病理形态学观察:光镜下见瘤细胞分散排列,由大、中、小三类细胞组,以中等大小细胞为主。瘤细胞呈圆形、椭圆形或不规则形状。胞浆少而深染细胞核大,圆形、椭圆形、马蹄形、肾形或不规则形。核仁清楚可见,核染色质深染,可见核分裂相,可见双核或多核的瘤巨细胞。结论一、P388淋巴细胞白血病是采用腹腔内接种的腹水型小鼠肿瘤,它的瘤间质为液体,瘤细胞生长极旺盛,以DBA/2小鼠作宿主,接种后一般性状比较稳定,并能连续传代。二、传代宜用第6-8天之腹水,每只鼠接种瘤细胞数宜大于100万,接种成活率为98.6%,不受年龄、性别的影响。有1.4%的自发消退。三、P388肿瘤生长规律较恒定,潜伏朝3～4天,第4～6天为缓慢生长期,第6～12天为迅速生长期。瘤细胞的倍增期略早于腹水的倍增期。第12天以后,动物呈现恶液质状态,并进入濒死期,宿主平均存活14.07±3.24天。四、以上述方式按种瘤细胞后,腹水内之瘤细胞密度在最初6天急剧上升,以后逐渐下降。第6天时平均值为1.66±108/ml;,第14天时降至7.24×107/ml.最高密度可达2.52×106/ml,最低为3.25×107/ml。每只小鼠腹水内之活瘤细胞数平均可达到1.29×109。自第6天起平均每日腹水增长1.26ml,至第14天,平均腹水总量可达12～13ml。(本所遗传育种研究室赵宠旭、沈洁二同志参加了遗传检测的实验工作,特此致谢!)参考文献||1.CollingMJJr.ParkerJC,JNatCancerInst1972:49:ll392.LiLH,etal:CancerRegl984:44:28413.徐叔云主编,药理实验方法学.北京:人民卫生出版社.P1117.19854.范国鹰等主译:新抗癌药的研究方法-美、苏专题论文集。北京:人民卫生出版社,Pl70,19815.GeranRI,etal:CancerChemotherRep(Part3)1972:3:1-103STUDIESONTHEBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFMURIUNP388LYMPHOCYTICLEUKEMIAOuyangZhuozhiWangHongbinLiGeetalAcademyofMedicalSciences,Beijing100021[Abstract]:ThispaperreportedthebiologicalcharacteristicsofmurineP388Lymphocyticleukemia.TheDBA/2inbredstrainmicewereinoculatedintraperitoneallywithP388tumorcellswhichcamefromtheascitesf6th-8thdaystumor-bearingmice,thetumorcellsinoculatedshouldbemorethanonemillionpermouse.Thesurivalrateofthisinoculatedtumorwas98.6%,with1.4%spontaneousregressioninourstudies.Thelatentperiodoftherumorwas3-4days,theslowandrapidgrowthperiodofthetumorwerewithin4th-6thdaysand7th-12thdaystespectively.Thetumorcellsmultipliedearlierthantheascitesdid.Afterthe12thday,themicewasonthevergeofthedeath.Themeanlifespanofthemicewas14.7±3.24days.Fromthe6thday,thevolumeofascitesofthetumorbearingmiceincreasedby1.26mlperday.Inthe14thday,themeanvolumeofascitesofthemicewasl2-l3mLKeywords:P388Iymphocyticleukemia;biologicalcharacteristic;DBA/2mice##61.CollingMJJr.ParkerJC,JNatCancerInst1972:49:ll392.LiLH,etal:CancerRegl984:44:28413.徐叔云主编,药理实验方法学.北京:人民卫生出版社.P1117.19854.范国鹰等主译:新抗癌药的研究方法-美、苏专题论文集。北京:人民卫生出版社,Pl70,19815.GeranRI,etal:CancerChemotherRep(Part3)1972:3:1-103##A##BSTUDIES ON THE BIOLOGICAL CHARACTERISTICS OF MURIUN P388 LYMPHOCYTIC LEUKEMIA Ouyang Zhuozhi Wang Hongbin Li Ge et al Academy of Medical Sciences,Beijing 100021 [ A

作者机构：中国医学科委实验动物研究所 

出 版 物：《北京实验动物科学》 (Laboratory Animal Science and Administration)

年 卷 期：1993年第10卷第1期

页      面：1-5页

学科分类：10[医学] 

主　　题：小鼠白血病 P388 生物学我特性 

摘      要：对从国外引进的小鼠淋巴细胞白血病(P388)的生物学特性进行了观察,实验结果表明以DBA/2近交小鼠为宿主,腹腔播种小鼠淋巴细胞白血病(P388)瘤细胞悬液,传代宜用第6一8天荷瘤鼠之腹水,每只鼠接种瘤细胞数宜大于1OO万。其接种成活率为98.6%,有1.4%的自发消退.肿瘤生长潜伏期3-4天,第4～6天为缓慢生长期,第6-12天为迅速生长期,瘤细胞的倍增期略早于腹水的倍增期.第12天后,动物呈明显恶液质状态并进入濒死期,宿主平均存活14.7±3.21天。自第6日起荷瘤小鼠平均每日腹水增长1.26ml.至第14日,平均腹水总量可达12-13ml.