番茄实用化PCR分子标记反应体系与程序优化

作     者：王晓敏 张倩男 芮文婧 吕原 高艳明 李建设 张亚红 Wang Xiaomin;Zhang Qiannan;Rui Wenjing;LüYuan;Gao Yanming;Li Jianshe;Zhang Yahong

作者机构：宁夏大学农学院银川750021 宁夏大学宁夏现代设施园艺工程技术研究中心银川750021 宁夏大学宁夏设施园艺(宁夏大学)技术创新中心银川750021 宁夏大学宁夏优势特色作物现代分子育种重点实验室银川750021 

出 版 物：《分子植物育种》 (Molecular Plant Breeding)

年 卷 期：2019年第17卷第4期

页      面：1238-1248页

学科分类：09[农学] 0902[农学-园艺学] 090202[农学-蔬菜学] 

基　　金：宁夏回族自治区农业育种专项(NXNYYZ20150303)资助 

主　　题：番茄 抗病基因 实用化PCR分子标记 正交设计 体系优化 

摘      要：为了提高抗病性分子标记检测的效率,为番茄病害检测及多抗品种选育提供技术依据,本研究通过改良CTAB法、96孔深孔板快速提取番茄微量叶片DNA;利用抗根结线虫病Mi标记,在L16(45)正交设计试验基础上,采用直观量化分析和方差分析两种方法,对番茄实用化PCR分子标记PCR反应的5个因素(引物, Mg2+, dNTPs,模板DNA和Taq酶)进行优化;随后分别筛选黄化曲叶病毒病、烟草花叶病毒病、根结线虫病、枯萎病、叶霉病和颈腐根腐病6种病害的8个实用化PCR分子标记PCR程序的退火温度;并对循环次数进行筛选;最后利用优化后的PCR体系与程序对供试的1 442份番茄材料(包括番茄种质资源,群体材料,组合及品种)进行抗病性鉴定。结果表明番茄实用化PCR分子标记的PCR最佳反应体系(20μL)为引物0.5μmol/L、Mg2+1.5 mmol/L、dNTPs 0.3 mmol/L、DNA 480 ng DNA、聚合酶1.0 U Taq;PCR程序中8个分子标记共同最适退火温度为56℃,最佳循环次数为33次;筛选出585份多抗(含2种以上的抗病基因)番茄材料,可作为中间材料或亲本材料进行多抗品种选育。该实用化PCR分子标记的PCR体系的建立为番茄利用抗病基因分子标记检测与筛选多抗种质资源、品种或群体材料提供了标准化的程序。