基于ThT荧光寿命检测蛋清溶菌酶蛋白寡聚体

作     者：李成 宋吉雪 刘婷婷 李妍 刘冰南 王亮 肖珊 李琳 耿旭辉 王际辉 LI Cheng;SONG Jixue;LIU Tingting;LI Yan;LIU Bingnan;WANG Liang;XIAO Shan;LI Lin;GENG Xuhui;WANG Jihui

作者机构：大连工业大学生物工程学院大连116034 东莞理工学院化学工程与能源技术学院东莞523808 中国科学院分离分析化学重点实验室大连116023 

出 版 物：《高等学校化学学报》 (Chemical Journal of Chinese Universities)

年 卷 期：2019年第40卷第1期

页      面：90-95页

核心收录：

学科分类：081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 070303[理学-有机化学] 0703[理学-化学] 

基　　金：国家重点研发计划项目(批准号:2016YFD0400203) 辽宁省自然科学基金重点项目(批准号:20170520043) 中国科学院分离分析化学重点实验室开放基金(批准号:KL-1704)资助~~ 

主　　题：寡聚体 硫磺素T 时间相关单光子计数 荧光寿命 

摘      要：采用时间分辨荧光技术,检测了不同形态蛋白聚集体的荧光染料硫磺素T(ThT)荧光寿命.利用蛋清溶菌酶体外制备了蛋白聚集体;采用透射电子显微镜(TEM)及ThT稳态荧光检测了结合蛋白纤维生长的动力学曲线,确定其形成寡聚体及纤维样聚集体的特征和时间.通过时间相关单光子计数(TCSPC)技术测定了蛋清溶菌酶单体、寡聚体和淀粉样纤维的ThT荧光寿命曲线,并拟合、计算其荧光寿命.根据圆二色谱(CD)分析结果推测聚集体的结构不同导致其与ThT的结合状态不同,从而影响ThT荧光寿命.结果表明,通过测定ThT荧光寿命可以区分蛋白单体、寡聚体和纤维样聚集体,并监测蛋白寡聚体的形成,为后续病理蛋白聚集过程中形成寡聚体物质的监测提供了研究基础.