广西巴马小型猪α-1,3-半乳糖转移酶基因RNAi载体构建与检测

作     者：郭晓萍 陈时锦 张笠 蒋钦杨 兰干球 郭亚芬 Guo Xiaoping;Chen Shijin;Zhang Li;Jiang Qinyang;Lan Ganqiu;Guo Yafen

作者机构：广西大学动物科学技术学院南宁530004 

出 版 物：《基因组学与应用生物学》 (Genomics and Applied Biology)

年 卷 期：2015年第34卷第6期

页      面：1165-1171页

核心收录：

学科分类：0905[农学-畜牧学] 09[农学] 

基　　金：广西科技基础条件平台建设项目(10-108-23)资助 

主　　题：巴马小型猪 α-1 3半乳糖转移酶基因 RNAi 

摘      要：α-1,3-半乳糖转移酶基因(α-1,3 GT)在异种器官移植中的免疫排斥反应有重要的作用,本研究旨在构建α-1,3-半乳糖转移酶基因的干扰载体,在m RNA和蛋白质水平鉴定并筛选出干扰效果最佳的序列。根据巴马小型猪GGTA1基因CDS序列,设计合成3对特异性单链si RNA序列以及一对阴性序列,构建GGTA1 RNA干扰载体分别命名为p LLU2G-sh GGTA1-1、p LLU2G-sh GGTA1-2、p LLU2G-sh GGTA1-3和p LLU2G-sh GGTA1-NC。将构建好的载体分别转染转染PK15细胞,通过q RT-PCR和Western blot检测GGTA1 m RNA及其蛋白的相对表达量。结果显示本研究成功构建了3个重组RNAi表达载体,与转染p LLU2G-NC和空白组相比,p LLU2G-sh GGTA1-1、p LLU2G-sh GGTA1-2和p LLU2G-sh GGTA1-3转染组的GGTA1 m RNA和蛋白表达量均明显下降,对m RNA表达的抑制效率分别为85.02%、86.05%和83.85%。本研究成功获得有效抑制广西巴马小型猪GGTA1基因表达的RNAi载体,为下一步生产沉默GGTA1基因广西巴马小型猪奠定基础。