与Rab2互作布鲁菌株效应蛋白HSP70的鉴定

作     者：崔桂梅 魏盼 赵玉玺 潘垒昌 徐晓晗 彭其胜 CUI Guimei;WEI Pan;ZHAO Yuxi;PAN Leichang;XU Xiaohan;PENG Qisheng

作者机构：吉林大学人兽共患病研究所/人兽共患病研究教育部重点实验室吉林长春130062 

出 版 物：《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 (Journal of Yangzhou University：Agricultural and Life Science Edition)

年 卷 期：2014年第35卷第2期

页      面：6-10页

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(31372409) 

主　　题：布鲁菌 Rab2 效应蛋白 HSP70 

摘      要：以Rab2作为诱饵钓取布鲁菌效应蛋白,通过RT-PCR获得鼠Rab2基因,利用基因克隆方法构建表达载体pGEX-4T-1-Rab2及其2个突变体pGEX-4T-1-Rab2[N119I]和pGEX-4T-1-Rab2[Q65L];然后IPTG诱导GST-Rab2、GST-Rab2[N119I]和GST-Rab2[Q65L]融合蛋白的表达,使用琼脂糖亲和介质分离纯化融合蛋白;最后将纯化的融合蛋白与超声破碎的野生布鲁菌或Δvirb2缺失布鲁菌株上清互作,利用SDS-PAGE电泳和银染确定差异蛋白,质谱分析差异蛋白。结果表明:所鉴定出的布鲁菌株效应蛋白为热休克蛋白HSP70。这为未来研究HSP70如何调节布鲁菌胞内寄生奠定基础。