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黑曲霉葡萄糖氧化酶基因的克隆及其在酵母中的高效表达

Cloning and Expression of Aspergillus niger Glucose Oxidase Gene in Methylotrophic Yeast

作     者:周亚凤 张先恩 刘虹 张成刚 Anthony E G Cass 

作者机构:中国科学院武汉病毒研究所武汉430071 中国科学院沈阳应用生态研究所沈阳110015 Biochemistry Department Imperial College of Science 

出 版 物:《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期:2001年第17卷第4期

页      面:400-405页

核心收录:

学科分类:0710[理学-生物学] 081703[工学-生物化工] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 082203[工学-发酵工程] 0822[工学-轻工技术与工程] 

基  金:国家自然科学基金资助! (3 9870 2 0 4)&& 

主  题:黑曲霉葡萄糖氧化酶 甲基酵母 基因表达 纯化 动力学分析 生物传感器 

摘      要:将黑曲霉葡萄糖氧化酶 (GOD)基因重组进大肠杆菌 酵母穿梭质粒pPIC9,转化甲基营养酵母Pichiapasto risGS115 ,构建出GOD的高产酵母工程菌株。在酵母α Factor及AOX1基因启动子和终止信号的调控下 ,黑曲霉GOD在甲基酵母中大量表达并分泌至胞外 ,经甲醇诱导 3~ 4d ,发酵液中的GOD活力可达 30~ 40u mL。SDS PAGE证实GOD在培养物上清中的含量显著高于其它杂蛋白 ,约占胞外蛋白总量的 6 0 %~ 70 % ,经QSepharoseTM FastFlow离子交换柱一步纯化即达电泳纯。重组酵母GOD比活达 42 6 6 3u mg蛋白 ,是商品黑曲霉GOD的 1 6倍。动力学性质分析表明 ,重组酵母GOD的Km 和kcat分别为 38 2 5mmol L和 34 92 6 6s- 1 ,与商品黑曲霉GOD相比 ,具有更高的催化效率。重组酵母GOD的高活力特性可有效提高葡萄糖传感器的线性检测范围。

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