高分辨熔解曲线技术检测HLA-G14bp插入/缺失突变方法的建立及初步应用

作     者：陈晓晴 余玲玲 王慧燕 田可港 郑晓群 

作者机构：温州医科大学附属第二医院检验科浙江温州325027 

出 版 物：《中国卫生检验杂志》 (Chinese Journal of Health Laboratory Technology)

年 卷 期：2014年第24卷第5期

页      面：719-722,725页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 

基　　金：浙江省重点科技创新团队(2012R10048-11) 浙江省医药卫生科技计划项目(2010KYA137) 温州市科技计划项目(Y20100258) 

主　　题：高分辨熔解曲线技术 人类白细胞抗原G 基因突变 EV71病毒 Epstein—Barr病毒 

摘      要：目的建立高分辨率熔解(HRM)技术检测人类白细胞抗原G(HLA-G)14 bp插入/缺失突变的方法,并初步探讨其临床应用价值。方法对HRM进行方法学评价。对100例EV71感染重症手足口病(HFMD)患儿、80例EBV感染传染性单核细胞增多症(IM)患儿和100例对照组进行HLA-G 14 bp插入/缺失突变的检测;用聚合酶链反应结合聚丙烯酰胺凝胶电泳(PCR-PAGE)法和产物测序法验证HRM分型。结果不同基因型HRM检测的批内、批间熔解温度(Tm)值的变异系数(CV)均0.1%;HRM与PAGE及直接测序所得基因型相符。100份EV71感染HFMD患儿DNA样本经检测,10份为14 bp+/+纯合子基因型,42份为14 bp+/-杂合子基因型,48份为14 bp-/-纯合子基因型,与对照组比较差别有统计学意义(χ2=6.181,P0.05),80份EBV感染IM患儿DNA样本与对照组比较差别亦有统计学意义(χ2=8.531,P0.05)。结论本研究建立的HRM技术可用于HLA-G 14 bp插入/缺失基因突变的检测。