P2X_7受体在RGC-5的表达及有效下调P2X_7基因的siRNA序列筛选

作     者：黄永霞 方敏 侯飞 胡慧玲 Huang Yongxia;Fang Min;Hou Fei;Hu Huiling

作者机构：暨南大学粤港澳中枢神经再生研究院广州510632 深圳市眼科医院(暨南大学附属深圳眼科医院)深圳518040 

出 版 物：《中国医师杂志》 (Journal of Chinese Physician)

年 卷 期：2018年第20卷第12期

页      面：1782-1786页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100212[医学-眼科学] 10[医学] 

基　　金：广东省自然科学基金项目(2014A030310081) 深圳医疗卫生三名工程(SZSM201812091)~~ 

主　　题：受体,嘌呤能P2X7 视网膜神经节细胞 RNA,小分子干扰 体外研究 

摘      要：目的检测嘌呤受体P2X_7信使RNA(mRNA)及其蛋白在RGC-5细胞系的表达。设计合成针对P2X_7受体的小型干扰RNA(siRNA),并筛选出其中能高效抑制其表达的序列。方法采用RT-PCR、Western blot及免疫荧光检测P2X_7受体mRNA及蛋白在RGC-5细胞系中的表达情况,并与小鼠视网膜及其他组织进行比较。设计针对P2X_7受体的3对干扰序列(P2X_7-siRNA-1～3),使用ribo FECTTMCP转染RGC-5细胞,60 h后检测细胞中P2X_7受体mRNA及蛋白表达变化。结果RGC-5细胞系与小鼠视网膜组织均能检测到P2X_7受体mRNA及蛋白的表达,且该受体主要表达于RGC-5的细胞核和细胞质。P2X_7-siRNA-3可同时有效下调P2X_7的mRNA和蛋白的表达。结论RGC-5可作为体外研究P2X_7受体作用的细胞模型。成功筛选出的针对P2X_7受体基因的siRNA将为后续下调该受体、减轻青光眼性视神经病变的基因治疗奠定基础。