血管生成抑制因子K4K5 cDNA基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

作     者：官孝群 王跃祥 吴良成 宋后燕 GUAN Xiao\|Qun 1\ WANG Yue\|Xiang 1\ WU Liang\|Cheng 2\ SONG Hou\|Yan 1* 1(Department of Molecular Genetics,School of Basic Medical Sciences,Shanghai Medical University,Shanghai 200032,China) 2(Department of Ophthalmology,Eye,Ear,Nos

作者机构：复旦大学医学院基础医学院分子遗传学研究室上海200032 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2001年第17卷第2期

页      面：126-130页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：上海医科大学医药生物技术风险基金! (990 2 ) 

主　　题：K4K5cDNA 克隆表达 毕赤酵母 新生血管生成 血管生成抑制因子 

摘      要：应用PCR方法 ,扩增人纤溶酶原cDNA基因中K4K5cDNA片段 ,与酵母表达载体 pPIC9K重组 ,获得表达质粒p9kkk 18。该质粒转化毕赤酵母菌GS115 ,用G418 YPD筛选高拷贝表型 ,PCR筛选K4K5cDNA与酵母染色体整合形成的阳性克隆 ,阳性克隆用甲醇诱导表达。表达产物r K4K5分子量约 2 1 5kD ,占分泌总蛋白 80 %以上 ,产物浓度为 15 0～ 2 5 0mg/L。初步纯化产物抑制牛毛细血管内皮 (BCE)细胞增殖与鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM )新生血管生成。