牙鲆发育中ALP基因表达图式及功能分析

作     者：陈晓武 施志仪 顾一峰 CHEN XIAO-Wu;SHI Zhi-Yi;GU Yi-Feng

作者机构：上海水产大学生物技术研究中心上海200090 

出 版 物：《中国海洋大学学报（自然科学版）》 (Periodical of Ocean University of China)

年 卷 期：2007年第37卷第6期

页      面：894-898页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 0908[农学-水产] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金项目(30271017) 高等教育博士项目科研基金(20040264001) 上海市重点学科建设项目(Y1101)资助 

主　　题：牙鲆 碱性磷酸酶 甲状腺素 

摘      要：为探讨研究碱性磷酸酶(ALP)在牙鲆发育变态中的表达与功能,采用组织学和分子生物学的方法对牙鲆ALP进行了研究。结果如下:1.组织化学染色显示原肠期胚体中即可以检测到ALP的活性。出膜后,在头和背部的活性比较强,而身体的内脏区域,活性较低,卵黄中没有表现出酶活性。仔鱼进食后,ALP开始在消化道中大量的表达,特别是在胃肠道粘膜层。2.牙鲆ALP cDNA全长为1 811 bp,预测能编码476个氨基酸的蛋白质。采用RT-PCR的方法在牙鲆卵到出膜后5天的时候不能检测到ALP基因表达,到变态前的仔鱼体内开始表达。在成鱼胃、肝、鳃、皮肤、皮下肌肉、肾中均能检测到ALP的表达。3.变态前的仔鱼身体总ALP活力约为出膜时的卵中酶活力的4倍,在变态期酶活力变化不大,但是在变态后期上升明显。甲状腺素(T4)在变态中对酶活力增加有明显的促进作用。作为甲状腺素合成抑制剂,硫脲(TU)能降低仔鱼体内酶活性。4.使用ALP的活性抑制剂左旋咪唑(TRM)处理的仔鱼消化功能和头部骨骼的发育受到一定的影响。消化道内食物很少,消化道上皮层中ALP免疫显色反应减弱。头部骨骼中发现较多骨细胞死亡而只留下一些细胞碎片,超过95%的仔鱼不能完成右眼的移位就发生死亡,变态比对照组迟缓。5.定量PCR结果表明,变态中期ALP基因表达量只有初期的1/2,变态后期却明显上升到变态初期的2.5倍,T4和TU处理对ALP基因表达产生影响的在中期和后期表现明显。中期T4组明显高于对照组和TU组,变态后期T4组和TU组均低于对照组。