基于不同沉淀方法检测小鼠心脏组织中S-棕榈酰化蛋白

作     者：程炜 占方玲 李水明 杨静波 王勇 刘宁 CHENG Wei;ZHAN Fang-Ling;LI Shui-Ming;YANG Jing-Bo;WANG Yong;LIU Ning

作者机构：吉林大学第二医院中心实验室教育部人兽共患病研究重点实验室 深圳大学生命与海洋科学学院 

出 版 物：《分析化学》 (Chinese Journal of Analytical Chemistry)

年 卷 期：2019年第47卷第1期

页      面：30-37页

核心收录：

学科分类：1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(No.81472030) 吉林省科技厅项目(No.20180101267JC)资助~~ 

主　　题：心脏 S-棕榈酰化蛋白 沉淀 质谱 

摘      要：酰基-生物素置换法(Acyl-biotinyl exchange,ABE)是利用生物素取代棕榈酸,进而对棕榈酸修饰的蛋白进行标记检测的方法,是检测S-棕榈酰化蛋白质的常用方法。本研究比较了ABE法中丙酮沉淀与甲醇-氯仿沉淀两种方法对S-棕榈酰化蛋白检测的影响,并对小鼠心脏组织中S-棕榈酰化修饰蛋白进行整体分析,进一步丰富S-棕榈酰化蛋白质的相关研究。首先用N-乙基马来酰亚胺(NEM)对小鼠心脏组织中蛋白质分子上的游离巯基进行封闭,再利用巯基反应性生物素化试剂(HPDP-Biotin)对羟胺(HA)切割后新产生的半胱氨酸巯基进行生物素标记,可检测出小鼠心脏组织中S-棕榈酰化修饰的蛋白。在此反应过程中,均通过蛋白沉淀法除去未反应的NEM、HA及HPDP-Biotin。基于不同沉淀方法对小鼠心脏组织总蛋白中的S-棕榈酰化蛋白进行标记后,利用链霉亲和素修饰琼脂糖珠对已标记上生物素的S-棕榈酰化蛋白进行富集,利用质谱检测分析。本研究共鉴定出50种S-棕榈酰化蛋白,其中丙酮沉淀实验组鉴定出23种S-棕榈酰化蛋白,甲醇-氯仿沉淀实验组鉴定出37种S-棕榈酰化蛋白,两组均鉴定出的蛋白有10种,不同的沉淀方法交叉互补使用可使鉴定结果更加丰富、可靠。