CK18对沉默HIF-1α的人“三阴”乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响

作     者：海玲 杜华 赵静 师永红 HAI Ling;DU Hua;ZHAO Jing;SHI Yonghong

作者机构：内蒙古医科大学基础医学院呼和浩特010110 

出 版 物：《山西医科大学学报》 (Journal of Shanxi Medical University)

年 卷 期：2018年第49卷第12期

页      面：1451-1455页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30860331) 内蒙古自治区高等学校科学研究项目(NJZC14155) 内蒙古医科大学青年创新基金资助项目(YKD2013QN008) 

主　　题：细胞角蛋白18 缺氧诱导因子-1α “三阴”乳腺癌 MDA-MB-231 细胞凋亡 

摘      要：目的研究CK18对HIF-1α干扰后的人三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响。方法采用shRNA干扰技术沉默MDA-MB-231细胞中的HIF-1α基因,选择RT-PCR及Western blot技术确定HIF-1α干扰效果。构建真核表达载体CK18-PEGFP-C1,以脂质体转染法将其转染入HIF-1α干扰后的MDA-MB-231细胞中,荧光显微镜下评估转染效率,Western blot检测CK18蛋白的表达情况。同时以空载体PEGFP-C1转染HIF-1α干扰后的MDA-MB-231细胞为阴性对照组。实验分别通过流式细胞术及Hoechst凋亡检测试剂盒检测CK18对细胞周期及凋亡的影响。结果构建了CK18-PEGFP-C1真核表达载体,基因测序结果与Gen Bank报道的完全一致,并转染了封闭HIF-1α基因的MDA-MB-231细胞,Western blot显示CK18蛋白表达上调。AnnexinⅤ-FITC/PI双染细胞凋亡检测分析CK18转染组早期凋亡率[(4. 9±0. 17)%]高于对照转染组[(3. 09±0. 25)%],差异有统计学意义(P 0. 05)。Hoechst染色试剂盒检测细胞凋亡显示CK18转染组的细胞凋亡率[(53±11)%]高于对照转染组[(21±13)%],差异有统计学意义(P 0. 05)。结论成功构建了CK18真核表达载体,并在HIF-1α干扰后的人三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞中稳定表达后,可促进细胞凋亡。