通过线粒体DNA D-Loop区序列分析鉴别多结节性肝细胞性肝癌细胞克隆起源

作     者：李仕来 黎乐群 彭涛 苏铭 LI Shi-lai;LI Le-qun;PENG Tao;SU Ming

作者机构：广西医科大学第一附属医院急诊科南宁530021 广西医科大学第一附属医院肝胆外科南宁530021 

出 版 物：《中国普外基础与临床杂志》 (Chinese Journal of Bases and Clinics In General Surgery)

年 卷 期：2010年第17卷第6期

页      面：567-572页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(项目编号:30960021 30460143 30560133) 广西地方性高发疾病防治研究重点实验室基金(项目编号:桂科能0630006-5E1K) 广西科学基金项目(项目编号:桂科自0640101) 广西大型仪器协作共用网资助(项目编号:468-2007-047) 

主　　题：线粒体DNA D-Loop区 多结节性肝癌 克隆起源 

摘      要：目的探讨通过线粒体DNA(mtDNA)D-Loop区序列分析鉴别多结节性肝细胞性肝癌(肝癌)细胞克隆起源的可行性。方法实验组为多结节肝癌组,标本来自广西医科大学第一附属医院肝胆外科2004年4月至2007年8月期间连续收治的42例共112个结节性HCC行根治性手术切除的肿瘤组织。对照组来自同期单结节HCC手术切除组织共20例40个样本,分2个亚组,对照组Ⅰ为16例单结节肝癌的2块不相邻的癌组织;对照组Ⅱ为4例伴有肉眼门静脉癌栓的肝癌患者,取癌组织和癌栓各1块;正常对照组来自同期肝移植供肝或肝外伤切除的肝组织共5例。用PCR结合直接测序的方法检测各样本组织mtDNA D-Loop区的序列,并分析各例癌结节中序列异同情况。结果在42例实验组标本中,共有131个位点发生碱基变异,其中15个位点为点突变,9个位点发生插入,16个位点发生缺失,共出现98个多态性变化,位点总变异率为11.7%(131/1122,1122为mtDNAD-Loop区全长);实验组中有20例各结节的mtDNA D-Loop区序列存在差异,可能为多中心(MO)起源,22例各结节的mtDNA D-Loop区序列完全相同,可能为单中心(即肝内转移,I M)起源。对照组20例中各样本的mtDNAD-Loop区序列完全相同,为相同细胞克隆起源。正常对照组中共有14个位点发生碱基变异,均为多态性,其中NT479AG为新的多态性。结论 mtDNA D-Loop区序列具有较高的变异率,应用PCR结合直接测序的方法检测该区序列并比较各个癌结节的DNA序列异同,可以快速、简单、有效地为区分I M和MO起源提供参考。