食蚊鱼(Gambusia afinis)cat、gapdh和gst基因的克隆及其在生态毒理学中的应用

作     者：欧瑞康 武小燕 库培佳 王兰 苏甜 梁惜梅 聂湘平 Ou Ruikang;Wu Xiaoyan;Ku Peijia;Wang Lan;Su Tian;Liang Ximei;Nie Xiangping

作者机构：暨南大学生命科学技术学院水生生物研究所生态系广州510632 

出 版 物：《生态毒理学报》 (Asian Journal of Ecotoxicology)

年 卷 期：2015年第10卷第3期

页      面：83-92页

核心收录：

学科分类：07[理学] 09[农学] 0903[农学-农业资源与环境] 0713[理学-生态学] 

基　　金：国家科技支撑计划课题(2012BAC07B05 20612033) 暨南大学科研培育与创新基金(21611609) 

主　　题：食蚊鱼 cat gapdh gst 实时荧光定量PCR 双氯芬酸 

摘      要：根据Ensembl、Genbank登录的鱼类cat、gapdh和gst基因的CDS序列设计普通PCR扩增引物,寻找食蚊鱼的cat、gapdh和gst基因的c DNA片段,并根据定量引物设计要求设计出相应的SYBR Green I荧光定量RT-q PCR引物,建立了食蚊鱼cat、gapdh和gst基因的SYBR Green I荧光定量RT-q PCR方法。该方法在104~108数量级范围内有良好线性关系(R=0.999~1.000);熔解曲线显示扩增产物特异性良好,均为单一峰值;质粒标准品最高浓度与最低浓度的批内试验变异系数与批间试验变异系数均低于2%。利用该方法监测和评价环境污染物对水生生物的影响,选择了水体中常见典型药物污染物——双氯芬酸,研究其对食蚊鱼抗氧化基因表达的影响。结果表明,雌性食蚊鱼暴露在不同浓度双氯芬酸钠(0.005、0.05、0.5和5 mg·L-1)24 h后,其肝脏cat、gapdh和gst的mRNA呈现显著变化,相对于对照组,在低浓度0.005 mg·L-1时,cat与gst mRNA的表达量均有极显著上升(p0.01),而其它浓度均极显著下降(p0.01)。试验表明该方法具有快速、精确、灵敏度高的优点,可为利用该类小型鱼类的原位污染物的生物监测和生态毒理评价提供有力的技术支持。