纳米细菌对肾小管上皮细胞损伤在肾结石形成中作用的研究

作     者：王议鹤 王勤章 吴双 申茂磊 褚浩 钱成 钱彪 WANG Yihe;WANG Qinzhang;WU Shuang;SHEN Maolei;CHU Hao;QIAN Cheng;QIAN Biao

作者机构：陕西省西安市儿童医院泌尿外科710000 石河子大学医学院第一附属医院泌尿外科新疆维吾尔自治区石河子市832000 湖北省武汉市第三医院430000 

出 版 物：《中国全科医学》 (Chinese General Practice)

年 卷 期：2018年第21卷第35期

页      面：4364-4370页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(81460140) 

主　　题：肾结石 纳米细菌 HK-2细胞 

摘      要：目的探究纳米细菌(NB)损伤人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)并导致晶体滞留的机制。方法于2016年10月—2017年10月在石河子大学医学院第一附属医院泌尿外科收集临床确诊肾结石且未应用药物或手术治疗患者的尿液培养NB。实验分为5组:对照组(胎牛血清、1640培养液+HK-2细胞)、NB组(NB菌液、胎牛血清、1640培养液+HK-2细胞)、一水草酸钙(COM)组(5 mmol/L COM悬液、胎牛血清、1640培养液+HK-2细胞)、纳米级羟基磷灰石(nHAP)组(300 mg/L nHAP、胎牛血清、1640培养液+HK-2细胞)和四环素干扰组(5 mg/L四环素、NB菌液、胎牛血清、1640培养液+HK-2细胞)。共同培养6、12、24 h后,采用光学显微镜及透射电子显微镜观察HK-2细胞的形态学变化;超声粉碎细胞后检测Na^+/K^+ATP酶和Ca^(2+)/Mg^(2+)ATP酶活性;检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、过氧化氢(H_2O_2)和丙二醛(MDA)含量;用激光扫描共聚焦显微镜观察加入COM晶体后各组细胞的晶体黏附情况。结果苏木素-伊红(HE)染色和透射电子显微镜结果可见,nHAP组和四环素干扰组HK-2细胞的损伤程度明显低于NB组。共同培养12、24 h后,NB组和COM组Na^+/K^+ATP酶和Ca^(2+)/Mg^(2+)ATP酶活性均低于对照组,H_2O_2含量均高于对照组(P0.05),nHAP组Ca^(2+)/Mg^(2+)ATP酶活性均低于对照组(P0.05),四环素干扰组Na^+/K^+ATP酶和Ca^(2+)/Mg^(2+)ATP酶活性均高于NB组(P0.05)。共同培养6、12、24 h后,NB组和COM组MDA含量均高于对照组(P0.05),四环素干扰组MDA含量均低于NB组(P0.05),COM组LDH含量均高于对照组(P0.05),nHAP组、四环素干扰组LDH含量均低于COM组(P0.05)。结论 NB可能通过诱导脂质过氧化反应损伤HK-2细胞,损伤程度和晶体黏附量与NB作用时间呈正比。四环素可以抑制NB对HK-2细胞的损伤并减少损伤后的晶体滞留。