反义微小RNA-21寡核苷酸抑制Tb3.1人舌鳞状细胞癌增殖的体外研究

作     者：陶英杰 任玉 董家斌 张仑 程俊萍 周旋 TAO Ying-jie;REN Yu;DONG Jia-bin;ZHANG Lun;CHENG Jun-ping;ZHOU Xuan

作者机构：天津医科大学附属肿瘤医院头颈肿瘤一科天津市“肿瘤防治”重点实验室300060 天津市基础医学研究中心 

出 版 物：《中华口腔医学杂志》 (Chinese Journal of Stomatology)

年 卷 期：2011年第46卷第2期

页      面：79-83页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：基金项目:国家自然科学基金(30971136) 

主　　题：舌肿瘤 癌,鳞状细胞 基因调节 

摘      要：目的 探讨反义微小RNA-21寡核苷酸（antisense oligonucleotide micro RNA-21,AS-miRNA-21）抑制Tb3.1人舌鳞状细胞癌增殖的效果和机制.方法 实验分3组,①空白对照组 ②无义寡核苷酸转染组 ③AS-miRNA-21转染组.寡核苷酸介导转染反义寡核苷酸敲低Tb3.1细胞miRNA-21表达.使用荧光实时定量聚合酶链反应（PCR）鉴定转染后Tb 3.1细胞miRNA-21表达水平 甲基噻唑基四唑（MTT）法检测转染后Tb 3.1细胞生存率 流式细胞术检测转染后Tb3.1早期凋亡 Matrigel基质生长实验检测转染后Tb 3.1细胞生长形成球形集落能力 Transwell体外迁移实验检测转染后Tb 3.1细胞迁移能力 蛋白质印迹法检测转染后Tb3.1细胞增殖核抗原（antigen KI-.67,Ki67）、B细胞淋巴瘤2（B cell lymphoma 2,Bcl-2）、人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因（phosphatase and tensin homolog,PTEN）、基质金属蛋白酶2、9（matrix metalloproteinase 2/9,MMP-2、MMP-9）和组织基质蛋白酶抑制因子蛋白1（tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP-1）蛋白表达.结果 荧光实时定量PCR显示转染后miRNA-21表达水平下调 转染第4天,AS-miRNA-21转染组肿瘤细胞生长速度[（53.43±11.83）%]低于其他两组[（91.32±8.02）%和100%]（F=27.02,P=0.00） 细胞凋亡率显著升高[（12.23±2.92）%,F=26.641,P=0.001] AS-miRNA-21转染组细胞生长不能形成球形克隆且通过Transwell小室聚碳酸酯膜的细胞数小于空白对照组（F=268.231,P=0.000） Ki67、Bcl-2、MMP-2和MMP-9蛋白表达下调,PTEN和TIMP-1蛋白表达上调.结论 敲低miRNA-21后Tb3.1人舌癌细胞增殖与侵袭能力被抑制,并为探索miRNA-21调控人舌癌发生机制提供实验依据.