利用正交实验设计优化马铃薯NBS-profiling反应体系

作     者：王颖 卢丽丽 周福仙 李先平 隋启君 潘哲超 Wang Ying 1,2,Lu Lili1,2, Zhou Fuxian1,2, Li Xianping1,2, Sui Qijun 1,2, Pan Zhechao 1,2.

作者机构：云南省农业科学院经济作物研究所云南省马铃薯工程技术研究中心昆明650205 农业部云贵高原马铃薯与油菜科学观测实验站昆明650200 

出 版 物：《分子植物育种》 (Molecular Plant Breeding)

年 卷 期：2018年第16卷第21期

页      面：7057-7062页

核心收录：

学科分类：09[农学] 0901[农学-作物学] 

基　　金：国家自然科学基金(31460368) 云南省应用基础研究计划项目(2013FZ152) 国家马铃薯产业技术体系岗位专家(CARS-09-P03) 云南省马铃薯种业研究示范型国际科技合作基地(2017IB040)共同资助 

主　　题：马铃薯 NBS profiling 正交设计 

摘      要：本研究以马铃薯品种自来洋芋为实验材料,利用正交试验的方法对影响马铃薯NBS profiling体系稳定性的7个主要因素:PCR Buffer体积、dNTP浓度、Taq酶活力、DNA模板浓度、引物浓度、引物接头浓度及稀释倍数,进行4水平设计,选用L32(47)正交表,以PCR产物的多态性为评价标准进行优化试验,从而建立多态性最高的反应体系。结果表明,马铃薯NBS profiling体系的优化反应体系最终确定为:在25μL体系中,10×PCR Buffer体积为2.5μL、dNTP浓度为250μmol/L、Taq酶活力为0.02 U、DNA模板浓度为400 ng、引物浓度为30μmol/L、引物接头浓度为20μmol/L,并将第1次PCR产物稀释10倍,该优化体系可有效提高NBS-Profiling的多态性。NBS-Profiling技术在马铃薯种质资源的抗病基因挖掘方面具有重要的应用价值,因此优化NBS-Profiling反应体系,确定多态性最高的反应体系对该方法的应用具有重要作用。