狂犬病病毒G蛋白的过表达及对病毒的抑制

作     者：阳佑天 张琼 张博越 刘文俊 罗永文 赵静 梅明珠 张莹 罗均 郭霄峰 YANG Youtian;ZHANG Qiong;ZHANG Boyue;LIU Wenjun;LUO Yongwen;ZHAO Jing;MEI Mingzhu;ZHANG Ying;LUO Jun;GUO Xiaofeng

作者机构：华南农业大学兽医学院广东广州510642 

出 版 物：《华南农业大学学报》 (Journal of South China Agricultural University)

年 卷 期：2018年第39卷第6期

页      面：10-17页

核心收录：

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 0710[理学-生物学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金："十三五"国家重点专项(2016YFD0500400) 国家自然科学基金(31172322) 广东省自然科学基金重点项目(2015A03031103) 

主　　题：狂犬病病毒 G蛋白 IFN-β通路 β干扰素 病毒滴度 

摘      要：【目的】探究G蛋白在狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)复制中的作用,以揭示携带双G基因的重组RABV的Hep-dG与亲代毒株rHep-Flury在神经母细胞瘤(NA)细胞中滴度差异的原因,为RABV致病机制的研究奠定基础。【方法】通过病毒吸附、入侵、荧光定量PCR、Western-blot以及中和抗体阻断等试验,检测G蛋白过表达对IFN-β以及相关因子转录的影响。【结果】Hep-dG感染能显著上调NA细胞中IFN-βmRNA的表达,激活了下游因子STAT1的表达与磷酸化,在较低的感染复数(MOI=0.01)下,Hep-dG感染后24 h即可显著促进IFN-β基因的表达,36 h达到最高水平(P0.001)。该病毒进入细胞后,产生了更多的病毒Leader RNA和RIG-I mRNA,且与IFN-βmRNA的表达高度一致。抗体阻断IFN-β后,Hep-dG在NA细胞中的病毒滴度显著上升(P0.01),约为阻断前的7.9倍,且与亲代毒株rHep-Flury无显著差异。与阴性对照比较,5μg的pH-G质粒转染能刺激IFN-β的转录(P0.05),表明真核表达RABV G蛋白能在一定程度上刺激IFN-β的转录。【结论】本研究初步揭示了G蛋白激活先天性免疫应答的原因和作用。RABV G蛋白的过表达,通过促进病毒Leader RNA的转录,激活了RIG-I介导的IFN-β通路,进而抑制了Hep-dG在NA细胞的繁殖。G蛋白的过表达也对干扰素通路起到一定的作用。