氢醌诱导下肝细胞PCNA、RAD6B及RAD18基因mRNA表达的时间效应

作     者：胡恭华 李锋 庄志雄 庾蕾 黄海燕 

作者机构：赣南医学院预防医学系江西赣州341000 深圳市疾病预防控制中心广东深圳518020 

出 版 物：《中国工业医学杂志》 (Chinese Journal of Industrial Medicine)

年 卷 期：2009年第22卷第2期

页      面：83-86,90页

学科分类：100405[医学-卫生毒理学] 1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 07[理学] 0713[理学-生态学] 10[医学] 

基　　金：国家重点基础研究发展计划(973)项目(2002CB512903 2002CB512904) 

主　　题：氢醌 PCNA RAD6B RAD18 mRNA L-02肝细胞 时间效应 

摘      要：目的研究氢醌(hydroquinone,HQ)诱导下L-02肝细胞PCNA、RAD6B及RAD18基因mRNA表达的时间效应,探讨PCNA、RAD6B及RAD18基因在HQ所致肝细胞毒性过程中的分子作用机制。方法体外培养的L-02肝细胞经40μmol/L的HQ诱导不同时间(6、12、24和48 h)后,用Trizol试剂从L-02肝细胞中分离总RNA,而后反转录为cDNA;利用Primer 3软件设计PCNA、RAD6B及RAD18基因及内参照β-ACTIN基因的引物,并进行标准曲线分析和熔解曲线分析,建立和优化定量检测各目的基因在mRNA水平上表达的反应体系和反应条件;最后采用实时荧光定量PCR法检测不同时间点PCNA、RAD6B及RAD18基因mRNA的表达状况。结果在各时间处理组(6、12、24和48 h)中,染毒组L-02肝细胞内PCNA、RAD6B及RAD18基因在mRNA水平上的表达均高于未染毒组。在24 h的时间范围内,PCNA基因在mRNA水平上的表达无论是染毒组(40μmol/L)还是未染毒组(0μmol/L),均具有随时间的延长而增加的趋势;到24 h时,相对表达量达到最大值。RAD6B和RAD18基因在未染毒组中的表达在48 h范围内均有随时间的增加而升高的趋势,它们均在48 h时间点上表达最高,其相对表达量分别为2.66和4.32;但在染毒组中,RAD6B基因和RAD18基因在48 h处的表达则有所下降,其相对表达量分别由3.74和4.83降至2.78和4.61。结论HQ可以诱导PCNA、RAD6B及RAD18基因mRNA的表达上调,并且呈现一定的时序性。