Ad-delE1b55kD-shRNA/Survivin-EGFP的构建及鉴定

作     者：王春毅 傅仲学 WANG Chun-yi;FU Zhong-xue

作者机构：重庆医科大学附属第一医院普通外科重庆400016 

出 版 物：《第三军医大学学报》 (Journal of Third Military Medical University)

年 卷 期：2007年第29卷第13期

页      面：1293-1297页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：重庆市自然科学基金(2005BB5225) 

主　　题：肿瘤增殖型腺病毒 RNA干扰 存活素 结肠癌 

摘      要：目的构建特异性强,转染率高,针对人Survivin进行RNA干扰的肿瘤增殖型腺病毒载体(Ad-delE1b55kD-shRNA/Survivin-EGFP)。方法将针对人Survivin的shRNA的基因序列及EGFP基因序列克隆至肿瘤增殖型腺病毒穿梭质粒pAd-delE1b55kD;HEK-293细胞中包装出毒得到重组腺病毒Ad-delE1b55kD-shRNA/Survivin-EGFP并测序鉴定。用重组腺病毒感染结肠癌细胞HT-29并检测转染率,用RT-PCR和Westernblot分别检测转染后的HT-29细胞中SurvivinmRNA和蛋白表达的变化。结果序列测定证明针对人Survivin的shRNA序列及EGFP序列被成功构建到肿瘤增殖型腺病毒载体中;Ad-delE1b55kD-shRNA/Survivin-EGFP对结肠癌细胞HT-29的转染效率显著高于增殖缺陷型腺病毒载体和脂质体载体(P0.01);而对肝细胞的转染率则显著低于对结肠癌细胞株HT-29的转染(P0.01)。与复制缺陷型腺病毒载体和脂质体载体比较,转染Ad-delE1b55kD-shRNA/Survivin-EGFP后,HT-29细胞中SurvivinmRNA拷贝数及蛋白表达显著降低(P0.01)。结论构建成功携带针对人Survivin的shRNA的肿瘤增殖型腺病毒载体Ad-delE1b55kD-shRNA/Sur-vivin-EGFP,其能选择性地高效转染结肠癌细胞株HT-29并有效干扰Survivin,且较之增殖缺陷型腺病毒载体和脂质体载体具有更高的干扰效率。