LEDGFp52-siRNA真核表达载体的构建和鉴定(英文)

作     者：赵海生 王一 Hai-Sheng Zhao;Yi Wang

作者机构：第三军医大学西南医院眼科中国重庆市400038 

出 版 物：《国际眼科杂志》 (International Eye Science)

年 卷 期：2006年第6卷第5期

页      面：975-978页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

主　　题：LEDGFp52 RNA干扰 真核表达载体 构建 鉴定 

摘      要：目的: 构建 LEDGFp52 基因 RNA 干扰(RNAi)的真核细胞表达载体。方法: 以 LEDGFp52 为靶基因, 以 pGenSil-l 质粒为载体, 设计构建重组体, 根据 GenBank 数据库提供的LEDGFp52 基因核苷酸序列, 按照 Tuschl 设计原则, 选择设计两条带发夹结构的核苷酸序列, 克隆到空载体pGenSil-l 中, 转化 DH5α菌株, 提取质粒, 进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析。结果: 经酶切鉴定筛选出的重组体测序结果与目的序列完全一致, 重组载体构建成功,重组质粒转染 HeLa 细胞48h, Western blotting 检测到 LEDGFp52 蛋白表达的改变。结论: 利用 RNAi 技术可成功构建抑制 LEDGFp52 表达的小干扰 RNA 重组体。