磷酸水解酶对大肠杆菌工程菌合成番茄红素的影响

作     者：刘洋洋 王天民 郭佳慧 张翀 薛正莲 邢新会 LIU Yangyang;WANG Tianmin;GUO Jiahui;ZHANG Chong;XUE Zhenglian;XING Xinhui

作者机构：安徽工程大学生物与化学工程学院安徽芜湖241000 清华大学化学工程系生物化工研究所北京100084 清华大学合成与系统生物学中心北京100084 

出 版 物：《安徽工程大学学报》 (Journal of Anhui Polytechnic University)

年 卷 期：2018年第33卷第4期

页      面：1-5,42页

学科分类：081702[工学-化学工艺] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(NSFC21627812) 

主　　题：大肠杆菌DH1 番茄红素 磷酸水解酶基因 CRISPRi Golden Gate 

摘      要：实验以大肠杆菌DH1为宿主菌,在已有生产番茄红素大肠杆菌工程初始菌株lyc001的基础上,增加合成番茄红素途径中的关键基因crtEIB拷贝数;表征结果表明,相较于初始菌lyc001,番茄红素产量提高了34%,并将此菌命名为lyc011.利用CRISPR干扰(CRISPR interference,CRISPRi)原理以及Golden-Gate组装方法成功构建了可以靶向得到的57个磷酸水解酶基因的双single guide RNA (sgRNA)的质粒.将dCas9质粒和sgRNA表达质粒导入lyc011菌株中,通过下调这57个磷酸水解酶基因表达量,最终通过发酵表征成功筛选到了15个对番茄红素产量提高具有正向调节结果的磷酸水解酶基因,分别为:yjjG,aphA,nagD,yqaB,yidA,pphA,bacA,glpQ,pgpB,spoT,cpdB,nudJ,dgt,phoQ.