TLR4-PI3K—Rac1通路对巨噬细胞骨架及吞噬功能的影响

作     者：李飞 陈金丽 曾晓丽 包海荣 刘晓菊 Li Fei;Chen Jinli;Zeng Xiaoli;Bao Hairong;Liu Xiaoju

作者机构：兰州大学第一医院老年呼吸科730000 

出 版 物：《中华医学杂志》 (National Medical Journal of China)

年 卷 期：2018年第98卷第34期

页      面：2743-2748页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金（81670033） 甘肃省重点研发计划（17YF1FA129） 

主　　题：巨噬细胞 Toll样受体4 细胞骨架 吞噬作用 

摘      要：目的 探讨Toll样受体4（TLR4）-磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）-Ras相关C3肉毒素底物1（Rac1）信号通路对巨噬细胞骨架重排及吞噬功能的影响.方法 小鼠巨噬细胞系RAW264.7分为空白组、阴性对照组及TLR4-RNA干扰（RNAi）组.将携带TLR4基因短发卡RNA（shRNA）的慢病毒颗粒及携带无意义对照序列慢病毒颗粒分别转染至TLR4-RNAi组及阴性对照组,空白组不进行转染.Western印迹法检测TLR4基因沉默效率.实时荧光定量PCR检测各组细胞PI3K、Rac1 mRNA的表达,Western印迹法测各组细胞PI3K、磷酸化Rac1（p-Rac1）、Rac1蛋白表达;激光共聚焦显微镜观察细胞骨架变化.流式细胞术检测各组细胞吞噬异硫氰酸荧光素标记的大肠杆菌（FITC-E.coli）的能力,用平均荧光强度（MFI）和吞噬细胞百分比（吞噬％）表示.结果 TLR4-shRNA慢病毒可成功转染RAW264.7细胞,转染效率为80％ ～90％,TLR4基因沉默效率为（63±4）％.沉默TLR4后,TLR4-RNAi组TLR4 mRNA和蛋白相对表达量（0.20±0.03、0.37±0.04）、PI3K mRNA和蛋白相对表达量（0.64±0.06、0.75±0.06）以及Rac1 mRNA、蛋白和p-Rac1蛋白相对表达量（0.75±0.04、0.76±0.01、0.74±0.05）均显著低于阴性对照组和空白组（均P〈0.01）.细胞骨架变化：沉默TLR4后细胞伪足伸出短少、僵硬,吞噬FITC-E.coli能力较弱,空白组和阴性对照组细胞伪足伸出良好,吞噬FITC-E.coli能力强.吞噬FITC-E.coli能力：TLR4-RNAi组MFI和吞噬％[（7453±564）、（70.20±2.27）％]均显著低于空白组和阴性对照组（均P〈0.01）.基础状态下及沉默TLR4后,TLR4、PI3K、Rac1 mRNA、蛋白表达与MFI、吞噬％均呈正相关（均P〈0.05）.结论 TLR4-PI3K-Rac1通路参与巨噬细胞骨架的重排,降低巨噬细胞的吞噬能力.