人热休克蛋白10在毕赤酵母中的表达及纯化

作     者：李晓颖 侯增淼 邓晗 李敏 李哲 杨小琳 赵金礼 LI Xiao-ying;HOU Zeng-miao;DENG Han;LI Min;LI Zhe;YANG Xiao-lin;ZHAO Jin-li

作者机构：陕西慧康生物科技有限责任公司陕西西安710054 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2018年第31卷第10期

页      面：1066-1070页

学科分类：0710[理学-生物学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 07[理学] 100103[医学-病原生物学] 071007[理学-遗传学] 10[医学] 

主　　题：人热休克蛋白10 毕赤酵母 真核表达 纯化 

摘      要：目的在毕赤酵母中表达及纯化人热休克蛋白10(heat shock protein 10,Hsp10)。方法取新鲜人胎盘组织提取总RNA,反转录合成c DNA。以其为模版PCR扩增Hsp10基因片段,构建外分泌重组表达载体pPIC9KHsp10,电击转化毕赤酵母GS115菌株,经组氨酸缺陷筛选,获得阳性菌株pPIC9K-Hsp10/GS115。重组菌经甲醇诱导,SDS-PAGE检测蛋白含量,Western blot分析Hsp10特异性。结果获取了序列正确的Hsp10基因及高表达菌株。表达产物在相对分子质量11 000处可见特异表达条带,Hsp10蛋白表达量为400 mg/L,纯度大于90%;Western blot分析表明,Hsp10具有良好的反应原性和特异性。结论 Hsp10在毕赤酵母GS115中成功表达,为该蛋白的放大生产及应用奠定了基础。