高三尖杉酯碱阻断mTOR信号通路抑制HT29人结直肠肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡

作     者：王丹妮 陶文杰 张旭 尤沛栋 穆新 曹佳 李晓菡 王立斌 WANG Danni;TAO Wenjie;ZHANG Xu;YOU Peidong;MU Xin;CAO Jia;LI Xiaohan;WANG Libin

作者机构：宁夏医科大学临床医学院宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院生物芯片国家工程中心宁夏分中心宁夏银川750004 

出 版 物：《细胞与分子免疫学杂志》 (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology)

年 卷 期：2018年第34卷第4期

页      面：346-353页

核心收录：

学科分类：1006[医学-中西医结合] 1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

基　　金：国家自然科学基金(81560474) 中国科学院"西部之光"人才培养项目(2014-91) 宁夏大学生创新训练项目(201710752025) 

主　　题：高三尖杉酯碱(HHT) 结直肠肿瘤细胞 细胞凋亡 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR) 

摘      要：目的探讨高三尖杉酯碱(HHT)对HT29人结直肠肿瘤细胞增殖和凋亡调控的分子机制。方法用(0、0.0078125、0.015625、0.03125、0.0625、0.125、0.25、0.5、1、2、4、8)μg/m L HHT分别处理HT29细胞24、48、72 h。CCK-8法检测HT29细胞的增殖,集落形成实验检测细胞的集落形成能力;Hoechst33258染色观察染色质凝集情况,流式细胞术检测细胞凋亡;实时定量PCR检测BAX、Bcl2、胱天蛋白酶3(caspase-3)、caspase-9、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、丙酮酸脱氢酶激酶(PDK1)、蛋白激酶B(AKT)、雷帕霉素靶蛋白调节相关蛋白(raptor)、雷帕霉素不敏感的伴侣蛋白(rictor)的mRNA水平;Western blot法检测BAX、Bcl2、胱天蛋白酶3前体(pro-caspase-3)、裂解型caspase-3(c-caspase-3)、pro-caspase-9、裂解型caspase-9(c-caspase-9)、多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、裂解型PARP(c-PARP)、mTOR、raptor、rictor、PI3K、PDK1、AKT、p-AKT的蛋白水平。结果与对照组相比,HHT能抑制HT29细胞增殖,诱导细胞核破裂,染色质凝聚,凋亡小体形成;同时,HHT处理能够提高HT29细胞中BAX/Bcl2比值、caspase-3、caspase-9、raptor的mRNA水平,降低PI3K、AKT、rictor的mRNA水平;并上调HT29细胞中c-caspase-3、c-caspase-9、c-PARP、BAX、raptor蛋白水平,下调pro-caspase-3、pro-caspase-9、PARP、PI3K、PDK1、AKT、mTOR、rictor蛋白水平。结论 HHT能够通过阻断mTOR信号通路,进而抑制HT29人结直肠肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡。