金黄色葡萄球菌噬菌体qdsa001内溶素的特性预测及克隆表达

作     者：吕晓倩 王静雪 林洪 LüXiaoqian;WANG Jingxue;LIN Hong

作者机构：中国海洋大学食品科学与工程学院山东青岛266003 

出 版 物：《食品科学》 (Food Science)

年 卷 期：2018年第39卷第18期

页      面：133-138页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金："十二五"国家科技支撑计划项目(2015BAD16B0902) 现代农业产业技术体系建设专项(CARS-47) 

主　　题：金黄色葡萄球菌 噬菌体 生物信息分析 内溶素 克隆表达 

摘      要：为获得噬菌体qdsa001的内溶素,本实验首先利用多种在线软件对内溶素lys56(Gen Bank:ARQ95812.1)的理化性质、信号肽、跨膜域和结构域等特性进行分析,然后选择克隆表达法制备目的蛋白。将合成的目的基因插入原核表达载体pET-30a中,构建重组质粒pET-30a-lys56,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)中,获得表达稳定的基因工程菌,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,利用镍琼脂糖亲和层析纯化表达产物。经在线软件预测结果显示,该蛋白分子质量为35.1 k Da,无信号肽和跨膜域,仅含有一个Ami_2结构域。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示重组蛋白表达成功,且以可溶性蛋白的形式存在于细胞破碎上清液,分子质量约35 k Da,与预期蛋白大小一致。重组蛋白最佳表达条件为:IPTG浓度0.5 mmol/L,20℃过夜诱导。