松针的显微及分子鉴别研究

作     者：龚恒佩 刘祖望 陈妍月 张坚 程汝滨 黄真 GONG Hengpei;LIU Zuwang;CHEN Yanyue;ZHANG Jian;CHENG Rubin;HUANG Zhen

作者机构：浙江中医药大学药学院浙江杭州310053 天津中医药大学药学院天津300193 

出 版 物：《浙江大学学报（医学版）》 (Journal of Zhejiang University(Medical Sciences))

年 卷 期：2018年第47卷第3期

页      面：300-306页

核心收录：

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 1002[医学-临床医学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81573643) 

主　　题：松科/化学 序列分析 药材显微鉴定 自动数据处理 

摘      要：目的:利用显微和分子鉴定技术对不同植物基源的松针药材进行鉴别,为松针的鉴别提供科学依据。方法:采用基源、显微鉴定的方法研究马尾松(Pinus massoniana Lamb.)、黑松(Pinus thunbergii Parl.)和华山松(Pinus armandii Franch.)的特征;利用PCR扩增和双向测序分析植物DNA条形码ITS2和rbc L序列特征;采用分子进化遗传分析(MEGA)6.0软件进行种间、种内Kimura2-parameter(K2P)遗传距离计算,并构建邻接系统聚类树。结果:三种松针数目及长度、维管束数、气孔线的分布、树脂道数目及分布等具有明显区别。马尾松、黑松和华山松的ITS2序列长度分别为470、469和470 bp,rbc L序列长度均为553 bp;ITS2序列在马尾松、黑松和华山松的种内变异率分别为0%、0.2%和2.8%,rbc L序列在这三种松针样品的种内变异率分别为0%、2.4%和1.1%。ITS2序列在松针的种内和种间遗传距离中不存在显著的条形码间隔;而rbc L序列的种内和种间距离存在一定的条形码间隔。邻接系统树结果表明,三种松针药材聚为不同的分支,rbc L条形码序列可鉴别马尾松、黑松、华山松及其近缘的植物。结论:利用基源、显微及分子鉴定技术可准确、快速地鉴别马尾松、黑松和华山松,为松针的质量评价和分类鉴别提供了方法和依据。