胚胎大鼠脊髓运动神经元与C2C12肌管体外共培养体系的建立

作     者：高颖娜 李晓雨 宋先敏 陈世彩 陈东辉 汤维芳 郑宏良 

作者机构：第二军医大学长海医院耳鼻咽喉头颈外科上海200433 

出 版 物：《第二军医大学学报》 (Academic Journal of Second Military Medical University)

年 卷 期：2013年第34卷第12期

页      面：1277-1280页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81070775)~~ 

主　　题：运动神经元 成肌细胞 肌收缩 共同培养技术 神经肌肉接头 

摘      要：目的获得胚胎大鼠脊髓运动神经元与C2C12肌管共培养的条件，在体外建立稳定的神经一肌肉共培养体系，并形成功能性的神经肌肉接头。方法C2C12成肌细胞株体外扩增培养至60％～70％融合时，用分化培养液诱导分化；取孕15～16d的SD大鼠，提取胚胎大鼠脊髓前角运动神经元细胞，种植到分化5d的C2C12肌管细胞中，在神经元基础无血清培养液Neurobasal＋2％B27中共培养。倒置显微镜下观察各个阶段神经元形态及突起长度的变化、肌管形态变化及收缩特性、神经肌肉接头的形成，应用免疫荧光染色技术检测突触后膜乙酰胆碱受体（acetyleholinereceptor，AChR）特异性结合物银环蛇毒素（ccbungarotoxin，α-BTX），并采用屏幕录像技术记录共培养体系中肌肉收缩现象。结果在共培养体系中，原代脊髓运动神经元与C2C12肌管细胞均能存活并进一步分化成熟。3d时，可见运动神经元伸出的轴突延伸至肌管膜表面或包绕肌管；1周时，肌管按同一方向排列，出现广泛的节律性收缩，同时免疫荧光染色结果显示α-BTX特异性结合突触后膜AChR；共培养10d后，运动神经元开始凋亡，肌管细胞逐渐出现萎缩现象。结论在体外培养条件下，无需特殊培养基和各种营养因子，运动神经元和骨骼肌细胞即可共同生存、生长并进一步发育，建立突触连接，触发一系列神经肌肉接头信号转导，引发肌管节律性收缩。