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烟草雄性不育突变株Y12的初步研究

A PRIMARY STUDY OF TOBACCO MALE STERILE MUTANT Y12

作     者:徐莺 倪为民 卫志明 许智宏 贾勇炯 陈放 XU Ying;NI Wei-min;WEI Zhi-ming;XU Zhi-hong;JIA Yoong-jong;CHEN Fang

作者机构:四川大学生物系成都610064 中国科学院上海植物生理研究所上海200032 

出 版 物:《四川大学学报(自然科学版)》 (Journal of Sichuan University(Natural Science Edition))

年 卷 期:2000年第37卷第3期

页      面:485-487页

核心收录:

学科分类:09[农学] 0901[农学-作物学] 

主  题:烟草 雄性不育突变株 育种 Y12 

摘      要:植物雄性不育材料,不仅在生产上为育种提供资源,同时也是研究植物雄性生殖发育分子机制的有用材料.雄性不育的材料通常是由自然突变或通过化学及物理诱导等方法获得的,这些方法尽管容易得到大量的突变子,但所获得的突变基因却不易分离.目前已经发展了一种基因标签法,通过插入已知序列的外源片段或转座子作为标签,使突变基因的克隆相对容易,该方法已成为某些实验室分离发育基因的常规方法[1~3].我们报道利用转基因方法获得烟草雄性不育突变株Y12及对其初步研究情况.1 材料和方法1.1 材料1.1.1 烟草品种 革新1号(Nicotiana tabaccum *** Xin No.1).1.1.2 根癌农杆菌菌株 LBA4404(Agrobacterium tumfaciens LBA4404).1.1.3 质粒 植物表达载体pBAL1带有卡那霉素抗性基因(细菌中表达),新霉素磷酸转移酶基因(nptⅡ)(在植物中组成性表达)和吲哚乙酰胺赖氨酸合成酶基因(iaaL)(在植物种子中特异表达).1.2 方法1.2.1 烟草的转化 按照文[4]进行.2.2.2 转基因烟草的鉴定 微量提取抗性植株(100mg)的总DNA溶入50μL TE缓冲液中,取5μL进行30μL体积的PCR扩增反应,引物顺序为P1:5’CGC AAG CCT TTG GCG AACAAG TCT C 3’,P2.5’AAT CAT CAT CGC AAG ACC GGC AAC AGG 3’.反应参数为:95℃,5min,一个循环; 93℃,40s;56℃,40s;72℃,60s;30个循环;72℃,***扩增反应阳性植株按照文[5]进行Southern杂交鉴定.

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