抗人Atg5单克隆抗体的制备与鉴定

作     者：张现伟 李志广 章崇杰 张小洪 蒋小梅 旷兴林 魏大鹏 罗志娟 毕建虹 

作者机构：四川大学华西基础医学与法医学院免疫学教研室四川成都610041 

出 版 物：《西部医学》 (Medical Journal of West China)

年 卷 期：2013年第25卷第3期

页      面：329-332页

学科分类：08[工学] 09[农学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：四川大学青年科学基金(2009SCU11144) 

主　　题：Atg5 单克隆抗体 Hela细胞株 宫颈癌 

摘      要：目的制备抗人Atg5单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定。方法以人Atg5重组蛋白作为免疫原免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗人Atg5单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用ELISA、Western Blot、免疫组化鉴定单克隆抗体的特性,并测定其效价、亚型及亲和力常数。结果成功筛选到一株能稳定分泌抗人Atg5单抗的细胞株1E7B3H9,亚型鉴定重链为IgG2b,轻链为kappa链。ELISA法测定腹水抗体效价为1:4.096×105,抗体亲和力常数为7.309×108 mol/L;Western blot显示此单抗能特异性识别人子宫颈癌Hela细胞系中的天然人Atg5蛋白;细胞免疫组化进一步显示Atg5表达在细胞质中。结论成功制备了抗人Atg5单克隆抗体,为进一步研究其与宫颈癌关系及在临床上的应用奠定了基础。