海岛棉纤维发育相关基因GbPDF2酵母单杂交文库构建及其上游基因解析

作     者：郑云娜 代华琴 曹跃芬 李金娟 戎均康 丁明全 Zheng Yunna;Dai Huaqin;Cao Yuefen;Li Jinjuan;Rong Junkang;Ding Mingquan

作者机构：浙江农林大学/亚热带森林培育国家重点实验室培育基地浙江杭州311300 浙江农林大学/浙江省农产品品质改良技术研究重点实验室浙江杭州311300 

出 版 物：《棉花学报》 (Cotton Science)

年 卷 期：2014年第26卷第3期

页      面：204-212页

核心收录：

学科分类：09[农学] 0901[农学-作物学] 

基　　金：国家自然科学基金(31071421 31200909) 浙江省自然科学基金(LQ12C06002) 抗草甘膦转基因棉花研发(浙江省新安化工集团股份有限公司 2013-2014) 

主　　题：棉花纤维 基因功能 酵母单杂交 SMART技术 cDNA文库 

摘      要：为研究棉纤维起始发育的分子调控网络,以海岛棉(Gossypium barbadence L.)品种海渝开花当天(0 DPA)胚珠为实验材料,利用酵母单杂交技术来筛选棉纤维起始发育相关基因GbPDF2的上游调控转录因子。首先,克隆GbPDF2的启动子(Accession:KJ475468);构建了该启动子的诱饵融合载体(GbPDF2-PRO)-pAbAi,转入酵母细胞中重组为Y1HGold[Bait-pAbAi]菌株。之后,应用Matchmaker Gold Yeast One-Hybrid Library Screening System系统构建酵母单杂交cDNA文库,转化重组酵母菌株,通过同源重组筛选GbPDF2的上游转录调节因子。构建的cDNA文库库容为2.23×106,重组率为95.8%,插入片段大小为300 bp^2000 bp,其中大于1000bp的阳性克隆为109个。cDNA插入片段经测序和Blast同源性分析,筛选出2个生长素响应因子,1个WRKY7转录因子,1个WD-repeatprotein 40等与纤维发育相关的转录调节因子,为研究棉纤维起始发育的信号转导通路奠定了基础。