抗菌肽Cecropin AD在毕赤酵母中的组成型表达及中试发酵研究

作     者：江学斌 张敏静 林健聪 梁世中 Jiang Xuebin;Zhang Minjing;Lin Jiancong;Liang Shizhong

作者机构：华南理工大学生物科学与工程学院 广州大学生命科学学院 暨南大学医药生物技术研究开发中心 

出 版 物：《饲料工业》 (Feed Industry)

年 卷 期：2011年第32卷第19期

页      面：25-29页

学科分类：08[工学] 082203[工学-发酵工程] 0822[工学-轻工技术与工程] 

基　　金：温州科技计划项目[No.20090279] 广东省科技攻关项目[2007A020300007-11] 

主　　题：抗菌肽 Cecropin AD 毕赤酵母 发酵 抑菌活性 

摘      要：构建表达抗菌肽Cecropin AD蛋白的真核重组表达质粒pGAPZα-A-CAD,并转化酵母菌Pichia pastoris X-33,Zeocin抗性筛选阳性重组子,通过PCR鉴定、Tricine-SDS-PAGE分析和琼脂孔穴扩散法筛选获得抗菌肽CAD组成型表达菌株,并采用pH-溶氧监控策略进行工程菌Pichia pastoris X-33/pGAPZα-A-CAD的50 L中试发酵研究。结果表明,本实验成功实现了抗菌肽CAD在毕赤酵母Pichiapastoris X-33中的组成型表达pGAPZα-A,Tricine-SDS-PAGE分析显示在4.0 kDa处有明显的目的条带,工程菌经50 L发酵罐培养48 h后收获的上清液,100℃热处理10 min后,对金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠杆菌ATCC25922等均有明显的抑杀作用。抗菌肽的组成型表达方法在本研究中得到了成功应用,中试研究为以后的规模化生产和应用奠定了基础。