不同浓度PRP对骨骼肌干细胞成骨分化的影响

作     者：单连成 王刚 张长青 曾炳芳 

作者机构：上海交通大学附属第六人民医院骨科上海200233 上海交通大学附属第六人民医院奉贤分院骨科 

出 版 物：《中国修复重建外科杂志》 (Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery)

年 卷 期：2009年第23卷第8期

页      面：991-996页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

主　　题：PRP 骨骼肌干细胞 诱导 成骨分化 兔 

摘      要：目的探讨不同浓度的PRP对体外培养的兔骨骼肌干细胞(skeletal muscle stem cells,SMSCs)诱导成骨的影响。方法1岁龄新西兰大白兔9只,体重2.5～3.0kg。从兔耳中央动脉取血参照Landesberg法制备PRP,并行全血和PRP中PLT计数。取兔右后肢比目鱼肌,体外培养兔SMSCs,取传至第3代的SMSCs,随机分为实验组与对照组。实验组加入含不同浓度(6.25%、12.50%、25.00%和50.00%)自体PRP的条件培养液进行干预,对照组不加PRP。于干预不同时间点行ALP染色观察、ALP活性测定、钙结节茜素红染色、骨钙素免疫荧光染色检测各组细胞成骨活性,RT-PCR检测成骨启动基因核心结合因子α1(core binding factor alpha1,Cbfa1)的表达。结果全血PRP及PLT计数为(3.06±0.46)×105个/μL和(18.08±2.10)×105个/μL;ALP染色观察示,培养7d各实验组细胞染色呈阳性,胞浆内可见大量黑色颗粒沉积;对照组细胞染色呈阴性。各实验组ALP活性均高于对照组(P0.05),其中12.50%浓度组各时间点均高于其他浓度组(P0.05)。培养14d各实验组经茜素红染色可见桔红色钙结节形成;对照组未见钙结节形成,矿化率为0。各实验组矿化率与对照组比较差异均有统计学意义(P0.05),12.50%浓度组矿化率均高于其余浓度组(P0.05)。培养7d各实验组骨钙素免疫荧光染色呈阳性,胞浆出现黄色荧光;对照组细胞染色呈阴性。RT-PCR检测示,培养4、12和24h对照组基因表达不同时间点无明显变化,实验组基因表达显著强于对照组,于12h时作用最明显,其中12.50%浓度组强于其他各浓度组。结论PRP能明显促进体外培养的兔SMSCs向成骨方向分化,其作用效果与PRP浓度有关,12.50%PRP作用效果较好。